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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 硫酸苯酚法测定多糖含量中量的问题
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点点tina

金虫 (小有名气)

[求助] 硫酸苯酚法测定多糖含量中量的问题

我做的标准曲线是比较好的，R2在0.99以上。我做多糖的提取之后算出来的多糖的含量极其少，在0.14mg/ml以下，可是它应该的范围是在4mg/ml左右，我想知道是否是硫酸苯酚法的问题呢？还是怎样呢？
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努力分离，好好解谱
1楼 2012-10-15 21:54:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

点点tina

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by guoheizi at 2012-10-16 22:12:18
妹子 你那玩意都没溶 你测个毛线啊 呵呵？
标准液我是说你确定自己配制的浓度没问题就好。
还有多糖你水提醇沉以后除蛋白烘干的这个地方可否说的清楚一些？你的多糖可以烘干么？？呵呵试问您是多少温度？

好吧 大哥，照你这么说应该是没有溶解吧。
这个我是先除的蛋白然后在醇沉得这个没问题吧，当时没有去掉氯仿正丁醇是不是有影响啊？我用的60烘干的，因为没有别的方法了，其他人很多用的冷冻干燥可是学校不让用啊 请赐教的说 谢谢哈
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努力分离，好好解谱
10楼2012-10-17 11:38:31
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普通回帖

632295417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
点点tina: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-16 21:53:29
你用的是葡萄糖的标准曲线吗？你的曲线范围貌似有点大啊。你说的不是特别清楚啊。我说一下我做的吧，线性范围是10-50微克，把供试品稀释到那个范围内进行测定的。我的供试品要是你那么大的浓度的话，吸光度会很大很大。一般吸光度要求要小于1的
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坚强勇敢的活着
2楼2012-10-16 10:25:48
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点点tina

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 632295417 at 2012-10-16 10:25:48
你用的是葡萄糖的标准曲线吗？你的曲线范围貌似有点大啊。你说的不是特别清楚啊。我说一下我做的吧，线性范围是10-50微克，把供试品稀释到那个范围内进行测定的。我的供试品要是你那么大的浓度的话，吸光度会很大很 ...

我用的是0.1mg/ml的多糖溶液，做出来的标准曲线是最大的0.015mg/ml吸光值是0.798.标准曲线是没有问题的。我说的数据是稀释后的，应该是稀释一百倍之后到0.70左右，可是我提取出来的是十倍之后0.7。所以我才想说是不是硫酸苯酚法有些测量不出来呢？
不好意思，这个实在是觉得数据太不靠谱了 谢谢
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努力分离，好好解谱
3楼2012-10-16 12:26:24
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632295417

木虫 (正式写手)
0.1mg/ml的多糖溶液是纯品，标准品吗？？你的意思是，标准品稀释100倍是0.7，你提的是稀释10倍0.7？我个人认为这个方法应该是没有问题的，不知道你是哪步计算错了，还是什么的。
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坚强勇敢的活着
4楼2012-10-16 13:54:35
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szq215216

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
方法肯定木有问题，药典都有。你为什么说它的范围应该在4mg/ml左右呢，用的什么方法？是硫酸苯酚法吗？
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5楼2012-10-16 17:40:17
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点点tina

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by szq215216 at 2012-10-16 17:40:17
方法肯定木有问题，药典都有。你为什么说它的范围应该在4mg/ml左右呢，用的什么方法？是硫酸苯酚法吗？

就是我提取出来之后的问题，我用的水提醇沉法，用乙醇沉淀后除蛋白、烘干得到的多糖，称取了1.2g定容到了250ml，应该不会太小的啊。到底是为什么呢？是水提醇沉得问题吗难道，求指点 谢谢
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努力分离，好好解谱
6楼2012-10-16 20:53:39
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guoheizi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-10-16 23:19:47
我现在在做多糖 r2 两个9 其实不计较的话也可以的。问题的关键是你（ 称取了1.2g定容到了250m ）这个多糖全溶解了么？多糖是大分子溶解性实际上是比较差的某些情况下。还有你是要测定你除完蛋白以后这个物质里面的含糖量么？你的标准品溶液的浓度你确定好了昂？呵呵 我用过这个方法测定糖含量 方法学上肯定没问题。
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7楼2012-10-16 21:27:27
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点点tina

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by guoheizi at 2012-10-16 21:27:27
我现在在做多糖 r2 两个9 其实不计较的话也可以的。问题的关键是你（ 称取了1.2g定容到了250m ）这个多糖全溶解了么？多糖是大分子溶解性实际上是比较差的某些情况下。还有你是要测定你除完蛋白以后这个物质里面的含 ...

首先是否溶解这个问题应该是不大能溶解吧，可是我是稀释之后测定的，就是又把它稀释了10、20、100测定的可是数值还是很小，当然有可能那个刚开始就没有完全溶解这个有可能。
其次我是想测定除掉蛋白质后、醇沉后的多糖的含量。
您所说的标准也是什么意思，我的是0.002--0.015好几个梯度过去的做的标准曲线，我看过别人的文章应该是没有问题的。谢谢你的答案 希望可以在说明一下你觉得可能的原因谢谢
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努力分离，好好解谱
8楼2012-10-16 21:57:45
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guoheizi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
点点tina: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2012-10-17 11:38:39
妹子 你那玩意都没溶 你测个毛线啊 呵呵？
标准液我是说你确定自己配制的浓度没问题就好。
还有多糖你水提醇沉以后除蛋白烘干的这个地方可否说的清楚一些？你的多糖可以烘干么？？呵呵试问您是多少温度？
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9楼2012-10-16 22:12:18
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