| 查看: 1735 | 回复: 3 | ||||
[求助]
测酶活的蛋白怎么保存 已有2人参与
|
|
各位亲，之前一直做基因克隆啊神马的，从没了解过测酶活什么的。我有一大批样品要测酶活，一次提蛋白是不可能的。我能不能从组织里提好蛋白放回-80保存，全部提完拿出来测酶活？还是提好了马上就要测酶活？放-80要怎么保存？毕竟我觉得保存组织和蛋白肯定不一样的吧？有做过的跟我说一下好吗？谢谢 顺便问一下，蛋白浓度能不能用微量测定仪测定啊？考马斯亮蓝法很麻烦啊。但是微量测定仪测的发文章准不准啊 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有105人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酶的最适pH的测定
已经有7人回复
- 酶活测定中的缓冲液
已经有4人回复
- 怎样测定固定化酶的酶活？
已经有11人回复
- 脱羧酶酶活测定
已经有3人回复
- 急求 植物CAT酶活的测定方法 ！！！
已经有18人回复
- 叶片抗氧化酶活性测定方法
已经有22人回复
- 测定酶活，同一个样品同样的标准，我测得就比别人偏低，不知道为什么？
已经有6人回复
- 测酶活性时总蛋白的测定
已经有12人回复
- 测定蛋白酶活性的方法
已经有5人回复
- 发酵液里淀粉酶酶活保存
已经有8人回复
- 酱油曲蛋白酶活测定
已经有15人回复
- 粉末的淀粉酶、蛋白酶怎么样保存才能使酶活尽量不变化
已经有7人回复
- 测定胃蛋白酶活力时候的问题
已经有10人回复
- 不同类别的蛋白酶的活力测定
已经有12人回复
- 关于比酶活的计算
已经有4人回复
- 纯酶不透析直接测酶活有影响吗
已经有12人回复
- 酶活与酶蛋白含量关系
已经有9人回复
- 用分光计怎么样测酶活?
已经有6人回复
- 植物鲜样及酶提取液的保存
已经有8人回复
- 【求助/交流】求高人-蛋白酶活检测的问题!
已经有7人回复
- 【求助/交流】求助测木瓜蛋白酶活性的方法！！！
已经有9人回复
- 【求助】蛋白酶活力测定
已经有7人回复
- 【求助/交流】如何测定酶活力的半衰期
已经有5人回复
- 【求助/交流】酶液保存
已经有7人回复
- 【求助】超氧化物歧化酶活性测定方法
已经有5人回复
winterb
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 6877.6
- 帖子: 65
- 在线: 665.6小时
- 虫号: 2045130
- 注册: 2012-10-06
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2014-05-21 04:28:19
为什么一定要用考马斯亮蓝法？nandrop不可以吗？ 3楼2014-05-29 15:24:22
飞约疯人院
专家顾问 (著名写手)
科学怪人
-
专家经验: +140 - MolEPI: 2
- 应助: 308 (大学生)
- 金币: 1103.5
- 散金: 8294
- 红花: 65
- 沙发: 5
- 帖子: 1996
- 在线: 266.1小时
- 虫号: 3188421
- 注册: 2014-05-07
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
ptccc(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-29 20:36:00
ptccc: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-31 10:12:39
ptccc(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-29 20:36:00
ptccc: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-31 10:12:39
|
转载： 一般一瓶动物细胞长满后用胰酶消化，消化完以后用D-Hinks吹打下来，4℃，1000转，6~10min 离心。倒掉上清，再用D-Hinks重新分散，4℃，1000转，6~10min 离心，倒掉上清（如果暂时不要测酶活的话，直接将离心后的沉淀冻于-80℃，可保存2~3个月，用时直接加生理盐水进行后处理即可）。再用生理盐水重新分散，枪头打匀，超声波破碎，一般一瓶动物细胞加1mL生理盐水，一般用总工作时间300S,，开5S，停10S，槽温度稍设高点，一般50℃（此温度与你EP管内的温度无关，但是温度探针伸到反应体系中的温度就得设低些），20%功率。破碎完后4℃，12000转，5min 离心（看底部的沉淀多少，破碎完全的沉淀应该是很少的，如果还很多，重新打散后加时间再破碎）。将上清取出摇匀后检测蛋白浓度，我用的是考马斯亮蓝+BSA法。然后蛋白用于即时检测，暂时不用的话立刻冻在-80℃，可保存2~3天，但破碎后的蛋白最好当天检测，不然活性会受到影响。 |
4楼2014-05-29 18:43:51
20