| 查看: 2939 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
细胞RNA提取一直失败 ，什么原因？ 已有3人参与
|
|||
|
新手，提取细胞RNA，连续几次都失败，不知问题出在哪里？ 具体步骤如下： 1） 6孔板，细胞汇合至90-100%，每孔加入1000ul trizol，反复吹打，使细胞溶解，室温静置5min。 2）将细胞的trizol裂解液转移至一1.5mlEP管中，加入200ul的氯仿/1000ul trizol，用手剧烈振摇15s，室温静置2－3min，4度 12000 转/分，离心15min。 3）吸取400ul上清转移至新的EP管中，加入500ul的异丙醇/1000ul trizol，上下摇晃3次，室温放置10min，4度 12000 转/分离心10min。 4）弃去上清（分别用大小枪头吸取），沉淀用1ml75％DEPC配制的乙醇溶液洗涤，4度 7500转/分 离心5min， 弃去乙醇溶液，加入20ul 0.1%的DEPC水溶解。 按上述步骤， 连续几次提取时在加入异丙醇离心后都看不到沉淀，用75％乙醇洗涤后才见很小很小的白色沉淀，最终溶解后检测OD260/OD280基本都在1.6-1.7，电泳跑胶30分钟，只有加孔样孔发亮，或者加样孔下有很短的弥散。已经做了几次了，都是如此，不知道什么原因，请高手指点。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 我的实验小助手 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有197人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RNA提取后，用过的研钵用什么才能洗干净
已经有9人回复
- RNA提取，怎么老是降解？求指导！！
已经有24人回复
- 细胞培养后的细胞用于提取RNA，在收集细胞后，要不要用depc水或trizol处理？
已经有6人回复
- 革兰氏阳性细菌-枯草芽胞杆菌 total RNA提取-问题求助
已经有5人回复
- RNA提取后跑胶泳道条带弥散，有亮带，请教这是什么原因呢？
已经有26人回复
- 提取RNA的试剂配制，水饱和酚里面溶解不了氯化钠啊~~求帮助啊~~
已经有5人回复
- Trizol提取的RNA有粘稠，跑胶有amear，怎么处理？
已经有8人回复
- 有关细胞总RNA提取
已经有16人回复
- 用TRIzol提白色念珠菌RNA，发现没法破壁，那么在用TRIzol提之前，该怎么预处理啊，
已经有7人回复
- 求助，新手关于总RNA提取
已经有3人回复
- RNA 提取如何保证质量
已经有17人回复
- Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖
已经有18人回复
- trizol 提RNA，DNA酶的问题
已经有7人回复
- 植物细胞RNA提取用的研钵要高温灭菌么？
已经有16人回复
- 提取RNA条带28/18为什么总是不成两倍关系啊？
已经有5人回复
- RNA提取后看不到28S的条带，但是18S的很亮是咋回事呢？
已经有12人回复
- RNA提取的细节
已经有147人回复
- 24孔板细胞可以提RNA和蛋白吗
已经有3人回复
- RNA 提取的一些问题，请大家帮忙回答
已经有13人回复
- RNA提取TRIZOL法最关键的注意步骤是什么
已经有18人回复
- 【求助/交流】请教高手关于从细胞中提取总RNA
已经有8人回复
- 【求助/交流】Hela细胞中RNA的提取
已经有6人回复
- 【分享】高人整理的细胞总蛋白的提取
已经有17人回复
- 谁能告诉我怎样在血液的淋巴细胞中提RNA
已经有8人回复
biot
木虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 2098.4
- 散金: 100
- 红花: 1
- 帖子: 294
- 在线: 116.3小时
- 虫号: 2859726
- 注册: 2013-12-09
- 性别: GG
- 专业: 代谢综合征
3楼2014-05-10 08:10:33
4楼2014-05-12 23:15:38
5楼2014-05-13 12:35:15
6楼2014-05-13 12:36:40
投票:
28