应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 细胞RNA提取一直失败 ，什么原因？
51/1返回列表
查看: 2952  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

那1022

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细胞RNA提取一直失败 ，什么原因？ 已有3人参与

新手，提取细胞RNA，连续几次都失败，不知问题出在哪里？
   具体步骤如下：
1） 6孔板，细胞汇合至90-100%，每孔加入1000ul trizol，反复吹打，使细胞溶解，室温静置5min。
2）将细胞的trizol裂解液转移至一1.5mlEP管中，加入200ul的氯仿/1000ul trizol，用手剧烈振摇15s，室温静置2－3min，4度  12000 转/分，离心15min。
3）吸取400ul上清转移至新的EP管中，加入500ul的异丙醇/1000ul trizol，上下摇晃3次，室温放置10min，4度 12000 转/分离心10min。
4）弃去上清（分别用大小枪头吸取），沉淀用1ml75％DEPC配制的乙醇溶液洗涤，4度 7500转/分 离心5min，
弃去乙醇溶液，加入20ul 0.1%的DEPC水溶解。
   
      按上述步骤， 连续几次提取时在加入异丙醇离心后都看不到沉淀，用75％乙醇洗涤后才见很小很小的白色沉淀，最终溶解后检测OD260/OD280基本都在1.6-1.7，电泳跑胶30分钟，只有加孔样孔发亮，或者加样孔下有很短的弥散。已经做了几次了，都是如此，不知道什么原因，请高手指点。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

我的实验小助手

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-09 20:45:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

那1022

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-09 22:42:04
1. trizol试剂是哪个公司的，是否是真品，市场上有很多高仿trizol

2. “弃去乙醇溶液，加入20ul 0.1%的DEPC水溶解。”
这一步弃去乙醇溶液后，需要将沉淀晾干，然后加入DEPC处理水

3. 电泳时，用相对较高的电 ...

谢谢版主。  用的 trizol试剂是国产的，不过学姐之前用它提动物组织都没问题。我后来又做一次，将细胞裂解时间延长至15分钟，就提出来了。
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-13 12:35:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

biot

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-13 12:52:50
是不是使用的东西没有灭菌，有RNAase？再就是乙醇没有吸干净，有残留

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
扬帆起航！
3楼2014-05-10 08:10:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘落Oo天气

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-13 12:52:56
感觉你裂解细胞时没弄好，我提DNA用CTAB 60度裂解40分钟，其间多次用漩涡混匀器剧烈震荡。
提取RNA 直接加液氮在研本里面磨碎的。或者加 trizol 用破碎机破碎10分钟以上。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-12 23:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

那1022

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biot at 2014-05-10 08:10:33
是不是使用的东西没有灭菌，有RNAase？再就是乙醇没有吸干净，有残留

谢谢回复。现在已经提出来了，是裂解时间不够。
赞一下 回复此楼
6楼2014-05-13 12:36:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 11:29 by xxniao123
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +5 苏东坡二世 2026-08-23 5/250 2026-08-27 10:39 by 炜雨
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 面上合作单位盖章 +3 ssyjh 2026-08-27 3/150 2026-08-27 09:59 by 阿拉贡aragon
[基金申请] 基金不中，共勉 +7 eulota 2026-08-26 7/350 2026-08-27 09:02 by hsding2026
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 17/850 2026-08-27 08:20 by 大萍1987
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 +7 晴天加油 2026-08-26 8/400 2026-08-27 07:53 by longfie172
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[职场人生] 学生撞见辅导员送外卖，第二天全班都沉默了 +3 鲸鱼融金_浙江_� 2026-08-22 3/150 2026-08-26 09:01 by zzuzxg
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭