应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问我全长基因跑出来之后为什么要小100bp左右呢？
51/1返回列表
查看: 2601  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

louisjackson

金虫 (小有名气)

[求助] 请问我全长基因跑出来之后为什么要小100bp左右呢？ 已有3人参与

我想构建一个目的基因的过表达质粒，在设计目的基因全长引物后跑PCR，结果产物的位置要比实际的小100bp左右，不知道究竟是为什么。内参条带的位置没有什么问题，偏偏是目的基因的产物要小很多。我的全长引物是根据目的基因的CDS序列进行设计的，设计完以后BLAST也没有什么问题，恰恰就是我想要的区间，就是不知为何跑出来却变样了？！求教各位高手了，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
It'snotaboutskill,butaboutwill.
1楼 2014-05-08 22:20:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisjackson

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 906394648 at 2014-05-13 19:54:25
我觉的不是maker的问题，建议你看看最原始的酶切位点，我怀疑不是单一酶切位点

我是跑的全长，还没有酶切呢。
赞一下 回复此楼
It'snotaboutskill,butaboutwill.
7楼2014-05-14 15:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序结果如何呢？agarose也没有那么精准，位置稍微有点偏差也比较正常
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-09 03:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisjackson

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-09 03:43:28
测序结果如何呢？agarose也没有那么精准，位置稍微有点偏差也比较正常

昨天全部跑胶了，然后胶回收做上连接了，打算今天重新跑个PCR拿去测序呢！但愿是胶或者marker的问题，这可是构建质粒的关键一步啊！
赞一下 回复此楼
It'snotaboutskill,butaboutwill.
3楼2014-05-09 10:15:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by louisjackson at 2014-05-09 10:15:53
昨天全部跑胶了，然后胶回收做上连接了，打算今天重新跑个PCR拿去测序呢！但愿是胶或者marker的问题，这可是构建质粒的关键一步啊！...

关键是看有没有条带，单一与否，构建质粒，之后转化，提取，酶切，看图谱，有时候大小稍微有偏差，测序之后是没有问题的
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-13 02:13:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 考博求助 10+3 社会实践对别 2026-11-08 3/150 2026-11-13 14:04 by 沐小虫252
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1Nb0IVlmV6v0 2026-11-11 4/200 2026-11-13 11:18 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-13 11:04 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 9/450 2026-11-13 11:02 by Equinoxhua
[考博] 27博士 +5 锦鲤送福至 2026-11-10 5/250 2026-11-13 06:22 by wlf1982
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:31 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:03 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 11/550 2026-11-12 09:57 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 09:46 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 09:41 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 5/250 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:42 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:09 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 9/450 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 02:23 by 9fOTqj074tIg
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭