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小猫三两只

金虫 (正式写手)

[求助] H+ATPase酶活测定 已有1人参与

我现在得到一个质膜H+-ATPase,在原核中表达,分离纯化后得到蛋白,想测一下酶活,请问怎么测?
(刚开始接触原核表达)
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lijiebnu

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

4楼2014-07-16 17:19:46
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查看全部 7 个回答

飘落Oo天气

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-04 21:47:34
请问你要测什么活性,质膜H+-ATPase的水解活性么?
2楼2014-05-02 01:53:31
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飘落Oo天气 at 2014-05-02 01:53:31
请问你要测什么活性,质膜H+-ATPase的水解活性么?

是水解活性,在原核中表达后分离纯化这个蛋白后,想测下这个酶的活性。
3楼2014-05-02 10:41:23
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飘落Oo天气

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质膜H+-ATPase 活性检测,其他H+-ATP酶参考下
0.5 mL酶反应液含3 mmol·L~ ATP,25 mmol·L
Hepes—Tris(pH 6.5)[这里可以做一个梯度,来测定下此酶的最适PH],3 mmol·L~ MgSO4,
50mmol · L一 KC1,0.015 (w/v)Triton X一100(视酶种类选择添加),加入15~ 30 mkg的膜蛋白启动反应,37℃温育30 min,以18% 三氯乙酸终止反应。

其间按需加入待测酶抑制剂来检测酶的纯度。
按Ohinishi 的方法检测无机磷的释放。酶
活单位用 mol Pi·mg protein·h 表示。
5楼2014-07-16 17:58:30
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