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[求助]
H+ATPase酶活测定 已有1人参与
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我现在得到一个质膜H+-ATPase，在原核中表达，分离纯化后得到蛋白，想测一下酶活，请问怎么测？ （刚开始接触原核表达） |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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本帖内容被屏蔽 |
4楼2014-07-16 17:19:46
2楼2014-05-02 01:53:31
3楼2014-05-02 10:41:23
【答案】应助回帖
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质膜H+-ATPase 活性检测，其他H+-ATP酶参考下 0．5 mL酶反应液含3 mmol·L～ ATP，25 mmol·L Hepes—Tris(pH 6．5)[这里可以做一个梯度，来测定下此酶的最适PH]，3 mmol·L～ MgSO4， 50mmol · L一 KC1，0．015 (w／v)Triton X一100（视酶种类选择添加），加入15～ 30 mkg的膜蛋白启动反应，37℃温育30 min，以18% 三氯乙酸终止反应。 其间按需加入待测酶抑制剂来检测酶的纯度。 按Ohinishi 的方法检测无机磷的释放。酶 活单位用 mol Pi·mg protein·h 表示。 |
5楼2014-07-16 17:58:30
