| 查看: 2394 | 回复: 19 | |||
fkbp23木虫 (小有名气)
|
[交流]
急问：有没有哪位虫虫朋友测过ATPase活性？ 已有4人参与
|
| 小女子刚刚开始测ATPase活性，用的方法是NADH，ATP，LDH，PK，PEP coupled spectroscopic assay方法，测NADH在340nm吸光度变化。蛋白量在0.25-0.5uM时时活性正常，可是增大到1uM以后，翻2或3倍后，活性值也不再增大，就像是到了极限似的，与实验室前人1uM的结果相比，还低了30%，十分郁闷，蛋白是新提出来的，应该不会有什么问题，方法都是一样的。不知道有什么方法可以鉴定一下到底是哪里出了问题呢，还请各位高人帮忙！>orz |
回复此楼» 猜你喜欢
070303 总分349求调剂
已经有5人回复
-
309求调剂
已经有5人回复
-
070300化学学硕求调剂
已经有5人回复
-
277材料科学与工程080500求调剂
已经有3人回复
-
0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历
已经有5人回复
-
环境工程调剂
已经有4人回复
-
材料专硕306英一数二
已经有4人回复
-
326求调剂
已经有3人回复
-
0854控制工程 359求调剂 可跨专业
已经有8人回复
-
国自科面上基金字体
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 谁有含硅双子表面活性剂的文献啊！急需！！
已经有3人回复
- 请问有哪位朋友用过大连中汇达公司的PEG-20M 的毛细管柱
已经有3人回复
- 在线等----急问关于美国签证check的文件
已经有30人回复
- 急问：文章正在大修结果发现相似度很大的文章刚在线发表？？
已经有31人回复
- 急问国内外淡水微藻、海洋微藻和大藻天然生物活性物质的研究比较牛的团队或个人
已经有7人回复
- 环氧树脂怎么测介电常数？急问啊
已经有12人回复
yang0071
木虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2009-07-05 20:09:43
zplipeng
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1191.1
- 散金: 103
- 红花: 1
- 帖子: 1411
- 在线: 65.7小时
- 虫号: 583579
- 注册: 2008-07-25
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2009-07-05 20:48:22
dfq0730
木虫 (文坛精英)
顺天府府尹
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 7.89
- 金币: 1752.8
- 散金: 5832
- 红花: 18
- 沙发: 16
- 帖子: 14630
- 在线: 191.4小时
- 虫号: 613132
- 注册: 2008-09-26
- 性别: GG
- 专业: 高分子物理与高分子物理化
4楼2009-07-05 21:56:41
jiaminl
铁杆木虫 (知名作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 7168.5
- 红花: 3
- 帖子: 8220
- 在线: 161.3小时
- 虫号: 663795
- 注册: 2008-11-27
- 专业: 药理学其他科学问题
5楼2009-07-05 22:00:27
200311310
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 23705.8
- 散金: 179
- 红花: 7
- 帖子: 4941
- 在线: 115.7小时
- 虫号: 515542
- 注册: 2008-03-01
- 专业: 化学工程及工业化学
6楼2009-07-05 22:24:08
7楼2009-07-06 00:12:34
8楼2009-07-06 08:55:27
HarveyWang
捐助贵宾 (知名作家)
海外行者
- BioEPI: 14
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 2277.2
- 散金: 24
- 红花: 65
- 帖子: 6880
- 在线: 946小时
- 虫号: 528557
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★ ★ ★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
fkbp23(金币+3,VIP+0): 7-6 10:37
fkbp23(金币+1):谢谢参与
fkbp23(金币+3,VIP+0): 7-6 10:37
|
小女子刚刚开始测ATPase活性，用的方法是NADH，ATP，LDH，PK，PEP coupled spectroscopic assay方法，测NADH在340nm吸光度变化。蛋白量在0.25-0.5uM时时活性正常，可是增大到1uM以后，翻2或3倍后，活性值也不再增大，就像是到了极限似的，与实验室前人1uM的结果相比，还低了30%，十分郁闷，蛋白是新提出来的，应该不会有什么问题，方法都是一样的。不知道有什么方法可以鉴定一下到底是哪里出了问题呢，还请各位高人帮忙 LZMM 你这才算是真正入门的检测方法！  测定酶活时，就是要做线性曲线，例如你的ATPase， 取0.1-1 uM做线性， 看看最高到多少时，反应吸光值就不成线性了，那就不用最高浓度了。 另外，ATPase的提取时，破碎方式和缓冲液微量成份对酶活测定会有影响。 例如夹杂极微量的重金属离子，会明显抑制酶活。 如果真是这样，优化一下自己的提取方法吧。 |
9楼2009-07-06 09:15:04
fkbp23
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2208.8
- 散金: 10
- 帖子: 184
- 在线: 83.9小时
- 虫号: 330803
- 注册: 2007-03-24
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2009-07-06 10:36:52
20