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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急问：有没有哪位虫虫朋友测过ATPase活性？
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fkbp23

木虫 (小有名气)

[交流] 急问：有没有哪位虫虫朋友测过ATPase活性？ 已有4人参与

小女子刚刚开始测ATPase活性，用的方法是NADH，ATP，LDH，PK，PEP coupled spectroscopic assay方法，测NADH在340nm吸光度变化。蛋白量在0.25-0.5uM时时活性正常，可是增大到1uM以后，翻2或3倍后，活性值也不再增大，就像是到了极限似的，与实验室前人1uM的结果相比，还低了30%，十分郁闷，蛋白是新提出来的，应该不会有什么问题，方法都是一样的。不知道有什么方法可以鉴定一下到底是哪里出了问题呢，还请各位高人帮忙！>orz
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1楼 2009-07-05 18:20:24
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
你可以用试剂盒测看看

产品名称： 动物细胞总ATP酶（total ATPase）活性比色法定量检测试剂盒
产品货号： GMS50250.1
产品规格： 20次
产品产地： 美国
品牌商标： genmed
供应商：   上海杰美基因医药科技有限公司
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2楼2009-07-05 20:09:43
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
为什么不问一下本实验室以前做的人呢。。。。。
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
3楼2009-07-05 20:48:22
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dfq0730

木虫 (文坛精英)

顺天府府尹
★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
同意楼上的
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...
4楼2009-07-05 21:56:41
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)
★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
没做过 帮顶一下
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Nevergiveup!
5楼2009-07-05 22:00:27
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200311310

至尊木虫 (职业作家)
★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
真是隔行如隔山啊。
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6楼2009-07-05 22:24:08
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郑B.CoA

金虫 (正式写手)
★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
我也建议问一问实验室做过这个实验的人,如果没有的话换试剂盒做做吧
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7楼2009-07-06 00:12:34
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lifefamily

★ ★ ★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
fkbp23(金币+2,VIP+0):谢谢，就是普通的ATPase吧 7-6 10:43
我们实验室测过Ca-ATPase 和Mg-ATPase，不知道你需要哪种？
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8楼2009-07-06 08:55:27
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★ ★
fkbp23(金币+1):谢谢参与
fkbp23(金币+3,VIP+0): 7-6 10:37
小女子刚刚开始测ATPase活性，用的方法是NADH，ATP，LDH，PK，PEP coupled spectroscopic assay方法，测NADH在340nm吸光度变化。蛋白量在0.25-0.5uM时时活性正常，可是增大到1uM以后，翻2或3倍后，活性值也不再增大，就像是到了极限似的，与实验室前人1uM的结果相比，还低了30%，十分郁闷，蛋白是新提出来的，应该不会有什么问题，方法都是一样的。不知道有什么方法可以鉴定一下到底是哪里出了问题呢，还请各位高人帮忙


LZMM
你这才算是真正入门的检测方法！

测定酶活时，就是要做线性曲线，例如你的ATPase， 取0.1-1 uM做线性，

看看最高到多少时，反应吸光值就不成线性了，那就不用最高浓度了。


另外，ATPase的提取时，破碎方式和缓冲液微量成份对酶活测定会有影响。
例如夹杂极微量的重金属离子，会明显抑制酶活。
如果真是这样，优化一下自己的提取方法吧。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
9楼2009-07-06 09:15:04
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fkbp23

木虫 (小有名气)
谢谢大家的帮助，buffer条件等等都是一样的，前人说她们都没遇到过这样的问题，开始怀疑自己的人品...郁闷...
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10楼2009-07-06 10:36:52
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