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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » H+ATPase酶活测定
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

[求助] H+ATPase酶活测定 已有1人参与

我现在得到一个质膜H+-ATPase，在原核中表达，分离纯化后得到蛋白，想测一下酶活，请问怎么测？
（刚开始接触原核表达）
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1楼 2014-05-01 15:29:59
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飘落Oo天气

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-04 21:47:34
请问你要测什么活性，质膜H+-ATPase的水解活性么？
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2楼2014-05-02 01:53:31
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飘落Oo天气 at 2014-05-02 01:53:31
请问你要测什么活性，质膜H+-ATPase的水解活性么？

是水解活性，在原核中表达后分离纯化这个蛋白后，想测下这个酶的活性。
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3楼2014-05-02 10:41:23
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lijiebnu

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2014-07-16 17:19:46
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飘落Oo天气

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质膜H+-ATPase 活性检测，其他H+-ATP酶参考下
0．5 mL酶反应液含3 mmol·L～ ATP，25 mmol·L
Hepes—Tris(pH 6．5)[这里可以做一个梯度，来测定下此酶的最适PH]，3 mmol·L～ MgSO4，
50mmol · L一 KC1，0．015 (w／v)Triton X一100（视酶种类选择添加），加入15～ 30 mkg的膜蛋白启动反应，37℃温育30 min，以18% 三氯乙酸终止反应。

其间按需加入待测酶抑制剂来检测酶的纯度。
按Ohinishi 的方法检测无机磷的释放。酶
活单位用 mol Pi·mg protein·h 表示。
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5楼2014-07-16 17:58:30
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飘落Oo天气

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by lijiebnu at 2014-07-16 12:19:46
同楼主问题，本人小白一枚，从Noji 处得到F1-ATPase，也想测下酶活，还请专业者详述如何做？多谢...

参考下我下面回复搂住的贴子，可能有帮助。
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6楼2014-07-16 17:59:37
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bobo123_77

新虫 (初入文坛)
楼主您好，我最近也在做H+ATPase的原核表达，换过好多个菌株了还是没有表达，不知道楼主用的是什么载体，谢谢

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7楼2017-06-05 17:04:31
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