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原核表达载体的选择 已有1人参与
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虫虫们，正在做原核表达，想请问一下 1.表达载体应该怎么选择尼？后期是要用纯化目的蛋白做抗体的，pET-22，pET-28，pET-30，我应该怎么选择尼？他们各自有什么优缺点？ 2.需要做融合表达的，N-端表达和C-端表达各有什么优缺点？ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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panda73
金虫 (小有名气)
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- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-05 15:58:18
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-05 15:58:18
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其实，关键在于表达后是否可溶。如果形成包涵体，就需要进行变性和复性，比较麻烦。为了方便纯化，可以考虑在N端或C端融合His-tag。考虑到要用作抗原，制备抗体，建议不要融合其它大分子。 而且现在也有一些公司提供E.coli分泌表达的载体（pBMP)，可以将一些结构比较简单的蛋白直接分泌到培养基中，纯化很方便，而且容易提高制备蛋白的纯度。 如果可能，可以考虑真核表达系统，确保结构正确且有功能。 事实上，如果实验室经费充足，可以直接将抗原制备和抗体制备包给专业的生物技术公司，效率更高。 Good luck. |
2楼2014-05-05 14:10:27
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