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zhaowenjuan

新虫 (小有名气)

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[求助] TA克隆如何操作？已有1人参与

大家好！我是第一次做TA克隆，很多东西不是很熟悉，有一些问题请教，希望能得到各位的解答，谢谢！
我选用的是pMD19-T载体，买的是takara公司的，看到上面带有Control Insert，不是很清楚它的作用，感受态准备用DH5a，筛选条件用amp抗性可不可以？培养基是不是可以用LB？不做蓝白斑筛选可以么？对于之后阳性克隆的验证，只做菌落PCR验证，不进行酶切验证而送去测序可以么？

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梅花香自苦寒来

1楼2014-04-25 10:20:41

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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

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注册: 2010-10-01
专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★ ★
zhaowenjuan(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 21:39:30

control insert是作为阳性对照的，看你的目的基因是否有问题的；AMP抗性可以，培养基就是LB，蓝白斑筛选能做就做吧。我都是做质粒快检，看质粒的位置，我做的时候菌落PCR容易出现假阳性，测序结果表明质粒快检呈阳性的大多是正确的克隆子

2楼2014-06-30 10:31:36

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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