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蜜桃椰果

新虫 (初入文坛)

[交流] 连接、转化以及酶切问题

各位师兄师姐好，我是新手，请教师兄师姐一些问题：我的目的基因分别是1938和894bp，我扩全长，用的DNAMAN设计的反义引物，分别都加有SacI和Xbal酶切位点以及保护碱基，扩出来的胶回收分别连接到T1-simple载体上做转化，感受态用的是全式金的，蓝白斑筛选出白斑和蓝斑做的菌液PCR没有问题，摇菌提的质粒，然后酶切，用的质粒模板16ul，酶各1ul，37°反应2小时45分钟，只有894bp的那个能切下来，但是和之前的菌液PCR跑电泳作对比要低一点点；1938bp的那个基因一直切不下来，我又把模板量稀释了一下，能切动，但是和菌液PCR产物对比要高一点点，很纠结啊，都做了2个月了，不是扩不出来就是切不下来，我的质粒PCR和菌液PCR以及894bp的酶切产物目的基因胶回收做的PCR均没有问题，请求各位师兄师姐多多指教啊~~~谢谢~~~
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1楼 2014-04-20 18:35:39
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