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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我酶切连接总是连不上去，连了很长时间的，恳请高手过来帮帮我
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

[求助] 我酶切连接总是连不上去，连了很长时间的，恳请高手过来帮帮我 已有11人参与

我目的基因500bp，载体11000多kb，酶切回收后，测的目的基因浓度35纳克/微升，载体78纳克/微升，我用过10微升体系连接，15微升体系连接，转化大肠杆菌总是长不出菌来，没有怀疑是平板或抗生素的问题，是不是我回收的的片段浓度太小，连接不上啊？图片是我回收完之后跑的电泳，目的基因和载体。
我酶切连接总是连不上去，连了很长时间的，恳请高手过来帮帮我
360软件小助手截图20140418145704.jpg
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1楼 2014-04-18 14:50:50
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-04-19 17:25:56
毫无疑问，浓度不够，目的片段建议50以上，载体片段建议30以上，比例1:7左右，看看抗生素有无问题，还有感受态的特性，会不会是致死所致

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-04-19 16:43:55
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鱼肠yu

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 18:48:48
感受态有没有问题？如果没有的的话可以调节一下目的基因和载体的比例试试
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2楼2014-04-18 15:32:29
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鱼肠yu at 2014-04-18 15:32:29
感受态有没有问题？如果没有的的话可以调节一下目的基因和载体的比例试试

感受态是刚买的，应该没问题，你看看我的目的片段跑胶是不是有点暗啊，35纳克/微升少不少？
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3楼2014-04-18 15:43:20
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周志惠

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
载体确定是11000多kb么？这是得有多大啊
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4楼2014-04-19 08:18:21
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