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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pMD18-T载体酶切的问题，求助高手！！！
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鸳鸯香炉01

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】pMD18-T载体酶切的问题，求助高手！！！ 已有2人参与

我把一个大约3kb的片段连接到一个2.7kb的t载体上，测序正确之后，酶切，可是酶切之后我的目的片段有，但是t载体那个条带总是没有，这是什么原因，怎么解决这个问题呢？
而且目的片段与目的载体连接也总是连不上，那个载体是大于10kb的，有什么好的办法吗？
谢谢大家了
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1楼 2010-08-23 15:27:36
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-08-23 21:05:22
电泳分3k和2.7k的片段需要跑比较长时间才能分开

3k和10k连接，建议延长时间，比如先连接过夜，在第二天上午加点atp和连接酶再连接到下午转化
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-23 15:54:00
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danny0426

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意，要想分开3k和2.7k片段，要制块长胶，胶浓度不要太大！
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-08-28 22:04:57
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