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鸳鸯香炉01

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】pMD18-T载体酶切的问题,求助高手!!! 已有2人参与

我把一个大约3kb的片段连接到一个2.7kb的t载体上,测序正确之后,酶切,可是酶切之后我的目的片段有,但是t载体那个条带总是没有,这是什么原因,怎么解决这个问题呢?
而且目的片段与目的载体连接也总是连不上,那个载体是大于10kb的,有什么好的办法吗?
谢谢大家了
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流! 2010-08-23 21:05:22
电泳分3k和2.7k的片段需要跑比较长时间才能分开

3k和10k连接,建议延长时间,比如先连接过夜,在第二天上午加点atp和连接酶再连接到下午转化
2楼2010-08-23 15:54:00
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danny0426

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同意,要想分开3k和2.7k片段,要制块长胶,胶浓度不要太大!
3楼2010-08-28 22:04:57
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