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zhtongshi

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA电泳

我最近在做连接，总是连不上，所以我想分析是哪步出问题。我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功，但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb)，如果可以，琼脂糖浓度是多少。请各位高手给个帮助吧!
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1楼2010-12-02 09:34:48
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amilie030312

金虫 (正式写手)
是连不上还是连接没有目的片段都是空载，你的连不上是怎么看出来的连不上呢？
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2楼2010-12-02 09:56:36
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
zhtongshi(金币+1): 2010-12-02 11:17:15
silicare(金币+3):谢谢参与 2010-12-02 12:07:47
引用回帖:
Originally posted by zhtongshi at 2010-12-02 09:34:48:
我最近在做连接，总是连不上，所以我想分析是哪步出问题。我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功，但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb)，如果可以，琼脂糖浓度是多少。请各位高 ...

你是单酶切吧？双酶切的话，直接就能看到2条带了。
我觉得可以，你酶切后质粒成线状，条带会比超螺旋的靠后（片段显得大）。你用kit提出来的质粒都是超螺旋结构。 胶浓度配稀点，但太稀就容易碎了。自己摸摸条件吧。0.8试试。

另外，我建议你转化后，板子一直放在37度里，有时候转化效率低，可能很久才长出斑来。我干过这种事，忘记拿出来了，放了2天，第一天什么都没有，第2天长了好多，最后测序，居然是我的东西。。。
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3楼2010-12-02 10:13:49
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