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zhtongshi

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】DNA电泳

我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题。我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以,琼脂糖浓度是多少。请各位高手给个帮助吧!
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amilie030312

金虫 (正式写手)


是连不上还是连接没有目的片段都是空载,你的连不上是怎么看出来的连不上呢?
2楼2010-12-02 09:56:36
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adslye

银虫 (正式写手)


★ ★ ★
zhtongshi(金币+1): 2010-12-02 11:17:15
silicare(金币+3):谢谢参与 2010-12-02 12:07:47
引用回帖:
Originally posted by zhtongshi at 2010-12-02 09:34:48:
我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题。我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以,琼脂糖浓度是多少。请各位高 ...

你是单酶切吧?双酶切的话,直接就能看到2条带了。
我觉得可以,你酶切后质粒成线状,条带会比超螺旋的靠后(片段显得大)。你用kit提出来的质粒都是超螺旋结构。 胶浓度配稀点,但太稀就容易碎了。自己摸摸条件吧。0.8试试。

另外,我建议你转化后,板子一直放在37度里,有时候转化效率低,可能很久才长出斑来。我干过这种事,忘记拿出来了,放了2天,第一天什么都没有,第2天长了好多,最后测序,居然是我的东西。。。
3楼2010-12-02 10:13:49
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