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龚-成-云

铜虫 (小有名气)

[求助] 做PCR一会能扩出带,一会扩不出带 已有1人参与

做简单PCR的时候,同一个基因,一会扩得出带,一会扩不出带。我们实验室的PCR仪器没有热盖,做的时候加了石蜡油。感觉每次做法都是一样的,唯一不一样的可能是石蜡油有时候加的多一点,有时候加的少一点,而且,每次再混完dNTP,Buffer,ddH2O,引物,模板后,没有离心,是加了石蜡油之后再离心的。不知道是不是先该混完样后就离心。这样对结果影响大不大。求高人赐教啊,一直被困惑着。
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做得了秀才,还要能做兵!
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR体系的加样顺序很重要,水、Buffer、dNTP、引物、酶,加酶之前要准备好PCR管等,冰上操作迅速分装、加模版、滴加石蜡油、离心,PCR采用热启动。

注意做对照实验,阳性对照和阴性对照。
2楼2014-04-09 02:33:49
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龚-成-云

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-04-09 02:33:49
PCR体系的加样顺序很重要,水、Buffer、dNTP、引物、酶,加酶之前要准备好PCR管等,冰上操作迅速分装、加模版、滴加石蜡油、离心,PCR采用热启动。

注意做对照实验,阳性对照和阴性对照。

我每次都是先把酶加进去,再加模板,再分装,最后才加引物。这样会影响很大吗?
做得了秀才,还要能做兵!
3楼2014-04-10 19:01:37
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