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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做PCR一会能扩出带，一会扩不出带
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龚-成-云

铜虫 (小有名气)

[求助] 做PCR一会能扩出带，一会扩不出带 已有1人参与

做简单PCR的时候，同一个基因，一会扩得出带，一会扩不出带。我们实验室的PCR仪器没有热盖，做的时候加了石蜡油。感觉每次做法都是一样的，唯一不一样的可能是石蜡油有时候加的多一点，有时候加的少一点，而且，每次再混完dNTP,Buffer,ddH2O,引物，模板后，没有离心，是加了石蜡油之后再离心的。不知道是不是先该混完样后就离心。这样对结果影响大不大。求高人赐教啊，一直被困惑着。
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做得了秀才，还要能做兵！
1楼 2014-04-08 21:12:41
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR体系的加样顺序很重要，水、Buffer、dNTP、引物、酶，加酶之前要准备好PCR管等，冰上操作迅速分装、加模版、滴加石蜡油、离心，PCR采用热启动。

注意做对照实验，阳性对照和阴性对照。
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2楼2014-04-09 02:33:49
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龚-成-云

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-04-09 02:33:49
PCR体系的加样顺序很重要，水、Buffer、dNTP、引物、酶，加酶之前要准备好PCR管等，冰上操作迅速分装、加模版、滴加石蜡油、离心，PCR采用热启动。

注意做对照实验，阳性对照和阴性对照。

我每次都是先把酶加进去，再加模板，再分装，最后才加引物。这样会影响很大吗？
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做得了秀才，还要能做兵！
3楼2014-04-10 19:01:37
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