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菜菜0929木虫 (小有名气)
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怎样获得反向序列 已有2人参与
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| 我的电脑装不上primer5，装了一个primer6，但是primer6粘贴序列的时候，没有反向、方向互补的选项，请教primer6上怎么得到反向序列？或者其他软件也行，只是除了primer5 |
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【答案】应助回帖
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关于普通PCR的引物设计，老板总会说：你要知道，你比软件聪明多了。还用什么设计软件？ 在目标区域的侧翼序列观察剪辑分布均匀的18-25bp小片段，注意引物之内和之间不能有连续4个碱基互补，3‘端不能连续3个碱基互补，最后一个碱基最好不是A；然后，将引物用NCBI数据库Blast，查看引物特异性，引物3‘端不断移动，直至寻找到特异性的引物为止。但反向序列要反转，可选用DNAMAN，DNAStar辅助，眼疾手快的也可自行手写，20多bp而已。 PS：引物合成也不值几个钱了，即使一时半会不行，多实践几次就上手了。 |
2楼2014-03-16 18:51:54
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5楼2014-03-16 19:39:53
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