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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

[求助] 基因合成了3200bp的一段序列,设计错误酶切位点导致目的基因不能切下,求办法!! 已有3人参与

本人基因合成了3200bp的一段序列,但是由于设计错误酶切位点,能将目的基因也切断,所以不能将完整的3200bp切下,用PCR扩增条带杂乱,求办法,求高人指点,不胜感激
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-15 12:26:03
自己做就行啊,quich change 就是做一次PCR,P的质粒而已啊。...

请问quickchange使用的哪家的试剂盒?
7楼2014-03-15 16:30:14
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

就正常PCR就好啊,产物用DpnI把模板消化,然后转化就好了。

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8楼2014-03-15 22:28:53
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普通回帖

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
卓尔不凡2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-15 10:40:59
卓尔不凡2012: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-15 16:30:41
合成的序列是在质粒里吗?
如果是的话,可以用quick change把合成错误的序列点突变纠正过来,楼主不要着急,问题很好解决的。
2楼2014-03-15 09:53:11
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
卓尔不凡2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-15 10:41:16
卓尔不凡2012: 金币+38, ★★★很有帮助, 10 2014-03-15 16:31:03
我对你的问题的理解是:你设计在片段两端的酶切位点在片段中间也有,做酶切时除了两边切断外,中间也切断了。这样的话可以设计一对引物,引物两端换上正确的酶切位点就行了。如果是在片段内部设计错误,那就做点突变变回来吧。
3楼2014-03-15 10:16:48
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
部分酶切就可以了,电泳后回收目的片段
4楼2014-03-15 10:32:24
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-15 09:53:11
合成的序列是在质粒里吗?
如果是的话,可以用quick change把合成错误的序列点突变纠正过来,楼主不要着急,问题很好解决的。

请问基因合成公司可以做点突变吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-03-15 12:18:08
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 卓尔不凡2012 at 2014-03-15 12:18:08
请问基因合成公司可以做点突变吗?
...

自己做就行啊,quich change 就是做一次PCR,P的质粒而已啊。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2014-03-15 12:26:03
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sinoer

铜虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

9楼2014-03-16 02:58:39
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by sinoer at 2014-03-16 02:58:39
如果是基因合成公司给你搞错的,那这公司也太不专业了...

是我自己失误设计错误的。
10楼2014-03-16 10:51:01
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