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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因合成了3200bp的一段序列，设计错误酶切位点导致目的基因不能切下，求办法！！
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

[求助] 基因合成了3200bp的一段序列，设计错误酶切位点导致目的基因不能切下，求办法！！已有3人参与

本人基因合成了3200bp的一段序列，但是由于设计错误酶切位点，能将目的基因也切断，所以不能将完整的3200bp切下，用PCR扩增条带杂乱，求办法，求高人指点，不胜感激
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1楼2014-03-15 09:48:49
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-15 12:26:03
自己做就行啊，quich change 就是做一次PCR,P的质粒而已啊。...

请问quickchange使用的哪家的试剂盒？
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7楼2014-03-15 16:30:14
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)
就正常PCR就好啊，产物用DpnI把模板消化，然后转化就好了。
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卓尔不凡2012
8楼2014-03-15 22:28:53
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普通回帖

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
卓尔不凡2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-15 10:40:59
卓尔不凡2012: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-15 16:30:41
合成的序列是在质粒里吗？
如果是的话，可以用quick change把合成错误的序列点突变纠正过来，楼主不要着急，问题很好解决的。
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2楼2014-03-15 09:53:11
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
卓尔不凡2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-15 10:41:16
卓尔不凡2012: 金币+38, ★★★很有帮助, 10 2014-03-15 16:31:03
我对你的问题的理解是：你设计在片段两端的酶切位点在片段中间也有，做酶切时除了两边切断外，中间也切断了。这样的话可以设计一对引物，引物两端换上正确的酶切位点就行了。如果是在片段内部设计错误，那就做点突变变回来吧。
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3楼2014-03-15 10:16:48
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
部分酶切就可以了，电泳后回收目的片段
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4楼2014-03-15 10:32:24
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-15 09:53:11
合成的序列是在质粒里吗？
如果是的话，可以用quick change把合成错误的序列点突变纠正过来，楼主不要着急，问题很好解决的。

请问基因合成公司可以做点突变吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-03-15 12:18:08
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 卓尔不凡2012 at 2014-03-15 12:18:08
请问基因合成公司可以做点突变吗？
...

自己做就行啊，quich change 就是做一次PCR,P的质粒而已啊。
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卓尔不凡2012
6楼2014-03-15 12:26:03
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sinoer

铜虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2014-03-16 02:58:39
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by sinoer at 2014-03-16 02:58:39
如果是基因合成公司给你搞错的，那这公司也太不专业了...

是我自己失误设计错误的。
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10楼2014-03-16 10:51:01
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