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千里幽寻

金虫 (小有名气)

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[求助] 帮忙看看哪里出问题了···考马斯亮蓝法测蛋白

考马斯亮蓝：100mg G250+50ml 95%乙醇+100ml磷酸，定容1000ml ，抽滤
标准蛋白：  0.5mgSBA，定容至500ml

标准曲线方法：
                                       0          1          2          3       4       5
蛋白添加量（0.1mg/ml）       0          0.2       0.4    0.6       0.8    1.0 （ml）
   水    （ml）                1          0.8       0.6    0.4       0.2    0
考马斯亮蓝（ml）                4          4          4       4          4       4
每个浓度做三个平行
测出来的吸光度如果不算零点，R*2值很高，可是如果加上零点的话，差别很大啊。下面是图

带零点.jpg

无零点.jpg

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Iamaslowwalker,butIneverwalkbackwards.

1楼2014-03-14 11:21:18

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青青-子衿

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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likedong1021: 金币+2, BM-EPI+1, 应助指数+1, 谢谢回帖交流！回答得非常系统！ 2014-03-18 19:15:16
千里幽寻: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢回复 2014-03-21 17:33:50

你好，关于用bradford测标准曲线来确定未知蛋白浓度是很传统，很经典的方法。
1.做标准曲线时，你不能只做5个点，一般要做8到10个点，如果某个点偏离曲线太远要舍掉，如果做标准曲线时取的点较少，很容易产生误差，拟合出来的误差较大。
2.现在比较流行用96孔板做，你如果用比色皿做的时候你要考虑你每次测完后比色皿是否清洗干净，有可能是你上次测完后没洗干净，蛋白有残余，影响下一次的测定。
希望对你有帮助！！！