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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于考马斯亮蓝法测蛋白的问题,请各位大神帮忙啊
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hanningangle

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于考马斯亮蓝法测蛋白的问题,请各位大神帮忙啊

我测量的是提取的大枣多糖中蛋白,考马斯亮兰的配制是:称取100mg考马斯,溶解在50ml95乙醇中,再加入85%磷酸100ml，最后将溶液定容至1升过滤棕色瓶低温保存,做标曲时线性还行,可是隔了两周测样时问题特别大,重现性很不好,我是以水做空白的,可是空白的颜色都不一样,有的浅黄,有的就成深绿蓝了,样品的颜色与空白相差不大,有的A是负的,感觉我的考马斯试剂颜色都不均匀,移取上面液体颜色浅,下面的颜色深,可是我查的这个试剂不是可以低温保存三月,应该很稳定,不知道问题出在哪,请各位大神帮帮忙啊
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1楼 2013-11-20 20:00:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+3, 谢谢参与 2013-11-26 18:03:23
样品浓度测定与标准曲线测定需要同时进行。有时候样品里的一些其他成分会干扰显色，可以用样品相同体积的缓冲液作为空白。做标准曲线稀释BSA时也加入同样体积的样品缓冲液。
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2楼2013-11-21 07:45:17
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liinguoming

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以去买一个brandford试剂，也就100多块钱。
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Enjoytheworldofpixels
3楼2013-11-21 16:19:12
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
★
silicare: 金币+1, 谢谢参与 2013-11-26 18:03:36
溶液配制好以后，要摇匀，过滤去杂质，避光保存。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
4楼2013-11-22 11:13:48
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+1, 谢谢参与 2013-11-26 18:03:54
溶液配制好放置在那，下次用之前要摇匀的。
配制的时候如果有沉淀要过滤。
配制的时候建议搅拌的情况下考马斯慢慢向乙醇里加，不要考马斯称好放在烧杯里，再往烧杯里加乙醇。
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5楼2013-11-23 13:59:44
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hanningangle

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小毛孩24 at 2013-11-23 13:59:44
溶液配制好放置在那，下次用之前要摇匀的。
配制的时候如果有沉淀要过滤。
配制的时候建议搅拌的情况下考马斯慢慢向乙醇里加，不要考马斯称好放在烧杯里，再往烧杯里加乙醇。

我想问一下如果试剂放置一段时间后使用时发现有沉淀,还能过滤不,还有这个试剂该怎样保存,一般能存放多久
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6楼2013-11-26 10:44:00
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hanningangle at 2013-11-26 10:44:00
我想问一下如果试剂放置一段时间后使用时发现有沉淀,还能过滤不,还有这个试剂该怎样保存,一般能存放多久...

如果配制的时间不长、沉淀不多，可以摇匀使用
室温避光一个月
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7楼2013-11-26 11:56:04
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hanningangle

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小毛孩24 at 2013-11-26 11:56:04
如果配制的时间不长、沉淀不多，可以摇匀使用
室温避光一个月...

我一直是在冰箱里保存,可能这个影响了我的显色
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8楼2013-11-26 15:34:05
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feiwen_1987

新虫 (初入文坛)
不知道你是用什么仪器测吸光度？
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9楼2015-08-03 18:12:20
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