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meetogo

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[求助] 关于考马斯亮蓝测蛋白，有几个疑问

1. 考马斯亮蓝染液的工作液是否需要现用现配呢？
2.100mgG250溶于50ml95%乙醇和100ml85%磷酸后，此溶液是否可以长期保存，用时稀释？
3. 每次测定时都需要过滤吗？
4. 标准曲线是做一次长期用呢，还是每换一瓶染液做一次呢，还是每次测定都要重新做一次呢？
5. 测定时的对照如何做？比如说我用酸溶液粗提取蛋白，离心取上清溶液，此为需测定样品，那么对照是不是就是等体积的酸溶液？
6.还有没有其他注意事项，使测定的结果更准确？

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1楼 2012-08-30 14:58:33

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小毛孩24

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【答案】应助回帖

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hsd3521: 回帖置顶 2012-08-31 18:52:49

标准曲线严格来说每次测定都要重新做的。
对照除了和样品的待测物质含量不一样其他都要一样，体积也要一样。
考马斯亮蓝测蛋白的标准曲线要好好做，如果lz实验室不是用的Eppendof、Gilson而是大龙之类的移液枪，建议使用移液管做标曲，这样能达到0.999

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6楼2012-08-31 17:50:15

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vvsober

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【答案】应助回帖

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meetogo: 金币+6, ★★★很有帮助, 同样谢谢楼上几位朋友！ 2012-09-02 08:41:19
hsd3521: 回帖置顶 2012-09-02 09:05:05

1. 我们实验室的考马斯溶液都最多放一个月的。我试过超过一个月的考马斯，影响也不是很大。。
2.我怎么记得我们之前是100mgG250最后定容成1000ml用的啊，稀释好了以后的溶液放1个月
3. 没过滤过
4. 配一次考马斯测一次标曲，每次配的溶液误差还蛮大的
5. 是的
6.每次测完的比色皿一定要用乙醇洗洗干净，彻底干了以后再测下一组。。

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