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RT-PCR实验求助
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本人第一次做RT-PCR(SYBR GREEN)相对定量实验,遇到一些问题求大家帮助。 1、使用常见的2^-delta delta CT的方法进行实验计算,实验前没有进行内参基因与目的基因的扩增效率比对,那么这个结果能直接用于毕业论文中么?会存在数据不完整的硬伤么? 2、在进行实验时,出现了CT值小于10的情况,数据如下: 内参基因CT值 目标基因CT值 实验组1 16.418 9.472 实验组2 23.044 20.187 对照组 18.541 6.179 为什么内参基因的CT值正常,而目标基因的CT值这么小,是说两个引物的扩增效率不一样么?可以实验组2的CT值都比较正常。这是什么原因造成? 由于样本DNA有限,不能奢侈的一遍遍实验,烦请大家帮我看看实验怎么做的。谢谢啊 [ Last edited by FCN2010 on 2014-3-12 at 11:01 ] |
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