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FCN2010

铁虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR实验求助

本人第一次做RT-PCR（SYBR GREEN）相对定量实验，遇到一些问题求大家帮助。

1、使用常见的2^-delta delta CT的方法进行实验计算，实验前没有进行内参基因与目的基因的扩增效率比对，那么这个结果能直接用于毕业论文中么？会存在数据不完整的硬伤么？
2、在进行实验时，出现了CT值小于10的情况，数据如下：
                    内参基因CT值     目标基因CT值
实验组1       16.418                9.472
实验组2       23.044                20.187
对照组         18.541                 6.179

为什么内参基因的CT值正常，而目标基因的CT值这么小，是说两个引物的扩增效率不一样么？可以实验组2的CT值都比较正常。这是什么原因造成？

由于样本DNA有限，不能奢侈的一遍遍实验，烦请大家帮我看看实验怎么做的。谢谢啊

[ Last edited by FCN2010 on 2014-3-12 at 11:01 ]
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毛爷爷都说了，好好学习
1楼 2014-03-12 10:53:45
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