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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 原核表达载体构建问题
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yiren12689

新虫 (初入文坛)

[交流] 原核表达载体构建问题已有3人参与

最近要做原核表达，原核表达载体构建的时候，不知道载体上的His-tag对表达蛋白有没有什么影响，需不需要带着或切掉？
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1楼2014-03-11 15:27:28
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yiren12689

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hsdq at 2014-03-12 17:12:41
His-tag 是在蛋白纯化时用的，载体构建时不需要切掉，不会有影响。

那信号肽是什么作用？怎么分析，有什么分析软件吗？
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3楼2014-03-19 10:08:38
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hsdq

新虫 (初入文坛)
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laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-03-12 17:41:28
His-tag 是在蛋白纯化时用的，载体构建时不需要切掉，不会有影响。
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2楼2014-03-12 17:12:41
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最后期纯化的时候Ni-NTA亲和层析吸附6Xhis标签，这样子就把杂蛋白洗脱掉了，留下了目标蛋白。因此不用切掉。在构建目的基因的时候在目标基因前面添加酶切位点，最后切掉就只剩下目标基因了。
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4楼2014-03-23 11:58:04
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hsdq

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yiren12689 at 2014-03-19 10:08:38
那信号肽是什么作用？怎么分析，有什么分析软件吗？...

一般是帮助蛋白质穿膜用的，跟蛋白质的细胞定位有关系。我用的是SignalP4.0软件预测的信号肽，其他的也有，但是这个应该是比较好些的
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5楼2014-03-24 11:08:40
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