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yiren12689

新虫 (初入文坛)

[交流] 原核表达载体构建问题 已有3人参与

最近要做原核表达,原核表达载体构建的时候,不知道载体上的His-tag对表达蛋白有没有什么影响,需不需要带着或切掉?
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yiren12689

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hsdq at 2014-03-12 17:12:41
His-tag 是在蛋白纯化时用的,载体构建时不需要切掉,不会有影响。

那信号肽是什么作用?怎么分析,有什么分析软件吗?
3楼2014-03-19 10:08:38
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hsdq

新虫 (初入文坛)

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-03-12 17:41:28
His-tag 是在蛋白纯化时用的,载体构建时不需要切掉,不会有影响。
2楼2014-03-12 17:12:41
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最后期纯化的时候Ni-NTA亲和层析吸附6Xhis标签,这样子就把杂蛋白洗脱掉了,留下了目标蛋白。因此不用切掉。在构建目的基因的时候在目标基因前面添加酶切位点,最后切掉就只剩下目标基因了。
4楼2014-03-23 11:58:04
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hsdq

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yiren12689 at 2014-03-19 10:08:38
那信号肽是什么作用?怎么分析,有什么分析软件吗?...

一般是帮助蛋白质穿膜用的,跟蛋白质的细胞定位有关系。我用的是SignalP4.0软件预测的信号肽,其他的也有,但是这个应该是比较好些的
5楼2014-03-24 11:08:40
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