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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 镍柱纯化酶挂不上柱子
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cassie小萍

新虫 (小有名气)

[求助] 镍柱纯化酶挂不上柱子已有1人参与

我的是乙酰木聚糖酯酶，用镍柱纯化时挂不上柱子。将粗酶液、过柱子后的酶液、wash buffer第一遍洗过的流出液、wash buffer第二遍洗过的流出液、Elution buffer洗脱的纯酶液跑SDS-PAGE，显示粗酶液和过柱子后的酶液有条带，其他没条带，也就是说没有纯化出来，可能什么原因呢？是不是要把粗酶液先浓缩一下再过柱子才可能纯化出来？
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1楼2014-03-10 13:59:08
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biology-girl

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的柱子 是新的 还是旧的？ 如果是旧的 建议你重生以后 再试试，一般柱子的寿命就是二十次左右。
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2楼2014-06-16 09:35:16
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zhuyuta0

新虫 (初入文坛)
我的也是挂不上柱子，柱再生了效率也很低，不知道是标签没漏出来还是bingding buffer的原因，楼主租出了了吗？给点经验
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3楼2019-03-16 15:54:27
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