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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 新手SDS PAGE每日一问
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zc10917

金虫 (正式写手)

[求助] 新手SDS PAGE每日一问 已有2人参与

昨日第一次跑胶，只做了分离胶，没弄浓缩胶，师姐表示不知道怎么灌浓缩胶，望给位前辈指导，有视频啥的最好了。
跑胶的条件是12% page 100v跑了1小时(溴酚蓝没变一条线)，然后380v跑到底

不管怎么说跑了一块胶，用CBB染色，过夜，不过早上有点事中午才来收。估计染了15个小时吧， 是不是太长了，总之结果是感觉胶明显变小了.

然后脱色，能够看到有条带。我加的样品中只含BSA(分子量66kd)，上样量大概是1微克，蛋白预先在含有DTT的上样缓冲中95℃反应5分钟。

条带有两个问题：1 条带位置离上样口很近 2 条带不是直线而是折线

今天做的和昨天差不多， 但感觉胶很容易碎 不知道是什么回事

希望各位前辈给予指导
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1楼 2014-02-28 18:09:02
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zc10917(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-02 18:40:11
silicare: 金币+3, 谢谢参与 2014-03-25 17:25:32
silicare: 应助指数+1 2014-03-25 17:25:59
首先，没有浓缩胶你这个电泳做出来能用吗。。。。。
然后，我觉得你的胶应该做的不好，做得好的话，图跑的还是可以的，你也可以试试在胶的一侧挂上冰。。。
最后，建议你把《分子克隆实验指南》这本书好好看看
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-28 21:28:06
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liu208xj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zc10917: 金币+10 2014-03-05 12:49:46
silicare: 金币+3, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-03-25 17:25:51
zc10917: 金币+18, ★★★★★最佳答案 2014-03-26 12:08:26
1)最好做浓缩胶；
2）仪器摆置水平；
3）染色液有机试剂浓度过高，造成胶小（也可能是时间长
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3楼2014-03-05 11:06:37
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zc10917

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liu208xj at 2014-03-05 11:06:37
1)最好做浓缩胶；
2）仪器摆置水平；
3）染色液有机试剂浓度过高，造成胶小（也可能是时间长

是脱色液有机溶剂太高了
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4楼2014-03-05 12:49:42
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-03-25 17:26:16
zc10917: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2014-03-26 12:08:16
没浓缩胶还是不行的，条带很诡异的。
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5楼2014-03-25 16:52:11
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