应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 用LB培养BL21(DE3)菌体总是死亡，求助！
171/2返回列表12下一页
查看: 4413  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

朱星星

银虫 (小有名气)

[求助] 用LB培养BL21(DE3)菌体总是死亡，求助！ 已有8人参与

我最近做原核表达，用BL21(DE3)，质粒PET32，我用保存的菌株划板、挑斑活化，用LB在37℃加氨苄培养，刚开始菌体扩增，可是过两个小时后总是死亡（由之前的乳黄状变成带渣滓的清澈状）。我没有加IPTG，只是纯粹扩增，最近总是这样。
同时做的其他蛋白都这样，而且之前做的挺好，说明不是毒蛋白的原因，而且活化的菌株应该没问题，因为刚开始我小量诱导很正常，四度保存过几天慢慢就不好了。有时候刚刚挑的斑也会摇不起来。LB我们都不调pH，之前做的挺好，我换了各种公司的去离子水，应该排除水质问题。各位大虾有没有遇到过类似情况的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-25 11:53:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zheng1993

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
难道是有噬菌体了吗
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-02-25 14:27:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
觉得这种问题可能是出在培养基组分上。酵母提取物和胰蛋白胨可以考虑换新的
至于其他的，看你们那问题还真不少。但是如果连细菌都养不活这个有些不能容忍了，很不专业了。
LB是不需要调pH的。我们这边都是按照分子克隆教材上的配方4g蛋白胨，2g酵母提取物，2g NaCl加400mL水，121°C 20min。
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-25 12:12:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwuwsu3

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是质粒不稳定，或者已经丢了。你试试不加抗生素，如果能长，就不是培养基问题。
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-25 12:47:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

朱星星

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-25 12:12:10
觉得这种问题可能是出在培养基组分上。酵母提取物和胰蛋白胨可以考虑换新的
至于其他的，看你们那问题还真不少。但是如果连细菌都养不活这个有些不能容忍了，很不专业了。
LB是不需要调pH的。我们这边都是按照分子 ...

培养基应该没问题，我们全部用进口新的，我们天天摇克隆菌都没问题，最近只有我做蛋白，年前年后都会出现这种情况。
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-25 14:11:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

朱星星

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zheng1993 at 2014-02-25 14:27:26
难道是有噬菌体了吗

我之前一直怀疑有噬菌体，如果这样怎么去降低影响呢？紫外灯充分照LB？
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-25 17:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zheng1993

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 朱星星 at 2014-02-25 17:35:05
我之前一直怀疑有噬菌体，如果这样怎么去降低影响呢？紫外灯充分照LB？...

甲醛熏蒸一晚上即可
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-26 12:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

你太善良

新虫 (著名写手)
我最近也遇到这样的问题，请问你解决了吗
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-26 12:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

julialv23

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问您的问题解决了吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-26 09:30:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by julialv23 at 2014-07-26 09:30:25
请问您的问题解决了吗？

既然还有质粒，重新转化就是啦

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2014-07-26 13:35:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 朱星星 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-30 19:13 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:53 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:50 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:20 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 17:11 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:03 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:19 by l0VvVHGBGRLv
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 06:57 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 06:10 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭