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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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crazymouse66

金虫 (正式写手)

[求助] 求助,AMP-LB培养基

昨天做的质粒连接(5μL),导入感受态细胞后加800μL的AMP-LB液体培养基摇3h,然后涂AMP-LB培养基,我涂平板时用的是200μL的体系。以前都没出现过这种情况,这次平板上出现了成片的菌苔。这是怎么回事?
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31569218

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
crazymouse66: 金币+2, 有帮助 2012-06-19 22:14:45
额,平板没划匀的过吧。。。
爱之深痛之切
2楼2012-06-19 11:33:58
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crazymouse66

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 31569218 at 2012-06-19 11:33:58
额,平板没划匀的过吧。。。

你好   以前我也是这样涂平板的,但是没有出现过这种状况,我在想是不是我的AMP失效了才导致杂菌感染,所以现在我把没用过的AMP平板都放在37℃下过夜,如果长菌的话那就是平板问题了。
3楼2012-06-19 12:45:56
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hchh2002

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
crazymouse66: 金币+2, 有帮助 2012-06-19 22:15:04
可以做个不带抗性的菌涂在板子上,做个对照试试。感觉像是Amp失效了。
4楼2012-06-19 20:49:21
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小love肖

铜虫 (初入文坛)

质粒转化时,涂板只需要30ul或50ul就足够了,而且导入感受态细胞后应加入不带抗性的LB液体培养基摇,不超过1h
5楼2012-12-18 10:21:03
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小love肖 at 2012-12-18 10:21:03
质粒转化时,涂板只需要30ul或50ul就足够了,而且导入感受态细胞后应加入不带抗性的LB液体培养基摇,不超过1h

为什么摇瓶的时候不加抗生素呢???新手求解啊
6楼2013-05-13 11:23:51
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

转化结束之后,20ul的转化也先加入180ul的不含AMP的LB培养基,150rpm/min,培养45min左右,然后再涂到AMP+LB的抗性平板上面,一开始不加抗生素的原因是:刚刚导入的质粒在E.coli中还没有表达,如果此时加入抗生素的话,对菌体生长不利。
7楼2013-05-14 09:07:09
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