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汕头大学海洋科学接受调剂
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朱星星

银虫 (小有名气)

[求助] 用LB培养BL21(DE3)菌体总是死亡,求助! 已有8人参与

我最近做原核表达,用BL21(DE3),质粒PET32,我用保存的菌株划板、挑斑活化,用LB在37℃加氨苄培养,刚开始菌体扩增,可是过两个小时后总是死亡(由之前的乳黄状变成带渣滓的清澈状)。我没有加IPTG,只是纯粹扩增,最近总是这样。
同时做的其他蛋白都这样,而且之前做的挺好,说明不是毒蛋白的原因,而且活化的菌株应该没问题,因为刚开始我小量诱导很正常,四度保存过几天慢慢就不好了。有时候刚刚挑的斑也会摇不起来。LB我们都不调pH,之前做的挺好,我换了各种公司的去离子水,应该排除水质问题。各位大虾有没有遇到过类似情况的。
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朱星星

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-25 12:12:10
觉得这种问题可能是出在培养基组分上。酵母提取物和胰蛋白胨可以考虑换新的
至于其他的,看你们那问题还真不少。但是如果连细菌都养不活这个有些不能容忍了,很不专业了。
LB是不需要调pH的。我们这边都是按照分子 ...

培养基应该没问题,我们全部用进口新的,我们天天摇克隆菌都没问题,最近只有我做蛋白,年前年后都会出现这种情况。
4楼2014-02-25 14:11:31
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ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
觉得这种问题可能是出在培养基组分上。酵母提取物和胰蛋白胨可以考虑换新的
至于其他的,看你们那问题还真不少。但是如果连细菌都养不活这个有些不能容忍了,很不专业了。
LB是不需要调pH的。我们这边都是按照分子克隆教材上的配方4g蛋白胨,2g酵母提取物,2g NaCl加400mL水,121°C 20min。
2楼2014-02-25 12:12:10
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liuwuwsu3

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是质粒不稳定,或者已经丢了。你试试不加抗生素,如果能长,就不是培养基问题。
3楼2014-02-25 12:47:10
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zheng1993

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
难道是有噬菌体了吗
5楼2014-02-25 14:27:26
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