应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 资料求助 » 牛激素蛋白纯化复性研究
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/1返回列表
查看: 1117  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

极道始之魔

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[交流] 牛激素蛋白纯化复性研究

近期在做牛激素的一个相关实验。从质粒构建到表达以及后期的纯化。
1.蛋白的表达量占总蛋白的70%差不多
2.在蛋白纯化过程中，小蛋白洗涤可以去除，但有几条大蛋白很难洗去，不想过柱子，不知道有没什么缓冲液可以洗的，见图
3.在包涵体复性的过程中，发现在复性后的蛋白在透析后，有些许蛋白析出来，但大部分没有，溶液看上去有点极淡蓝色的感觉。
4。做得是一个融合蛋白，不知道是不是只有复性好的蛋白才切的完？每次跑胶都是一半多切完了，，融合蛋白还有一点
5.目的蛋白，下面还有一条蛋白，不知道什么原因。从别的文献看也有这种情况，有时上面浓一点，有时下面浓一点，真是奇怪。同一种蛋白在不同状态下会跑出不一样的条带吗
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2014-02-19 15:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
极道始之魔: 金币+4 2014-02-20 20:11:35
没有图啊。
1.小分子蛋白和大蛋白如果分子量差很多，可以用超滤或者梯度离心方法分开。
2.复性蛋白可能存在理化环境改变后，蛋白结构改变，导致分子断裂的情况，这个正常。在你看来极淡蓝色是不是你表达的蛋白有金属键或者原子，例如铜或者镍。
3.你切的氨基酸点一样的话，和复性好不好关系不大啊。只要酶用的对就好。除非你复性后理化环境不适合酶工作。
4.你带MARK了没，没图没真相，不好判断。一般来说就是降解，不过要看距离和条带分布来判断的。
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-20 11:13:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-02-20 11:13:15
没有图啊。
1.小分子蛋白和大蛋白如果分子量差很多，可以用超滤或者梯度离心方法分开。
2.复性蛋白可能存在理化环境改变后，蛋白结构改变，导致分子断裂的情况，这个正常。在你看来极淡蓝色是不是你表达的蛋白有金 ...

没用过超滤，不过超滤的话蛋白损失应该很大。
断链的话，就加了nacl和咪唑，这个就没办法了
切这个蛋白的酶也是识别切掉部分空间结构的
可能降解了，但是蛋白一般应该不会降解啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-20 20:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
图1
牛激素蛋白纯化复性研究
照片(1).JPG
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-20 20:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
图2
牛激素蛋白纯化复性研究-1
照片 3.JPG
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-20 20:23:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
图3
牛激素蛋白纯化复性研究-2
照片 1(1).JPG
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-20 20:26:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
图1中，第1条marker，第2条纯化的融合蛋白，第3条酶切后的图片，分子量大小在20kd左右，出现了几条带感觉好奇诡。图2，是透析复性的图。图3是复性完的液倒在烧杯里，现在还不知道复性的蛋白它的溶液是成什么样子的
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-20 20:31:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

userhung

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
极道始之魔: 金币+1 2014-02-20 20:49:50
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~
赞一下 回复此楼
9楼2014-02-20 20:33:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
9楼: Originally posted by userhung at 2014-02-20 20:33:45
帮顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~

谢谢，希望可以得到解惑
赞一下 回复此楼
10楼2014-02-20 20:49:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我看你的电泳图，没啥异常啊，就自下而上的三个条带来说，酶切的那个分子量有点诡异，不过也差不多位置啊。
至于做超滤，得看你的分子量，用5kd的做透析，损失不大的。
看你透析后的溶液，感觉蛋白好浓，是不是聚集了啊
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

极道始之魔
12楼2014-02-27 12:52:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-02-27 12:52:09
我看你的电泳图，没啥异常啊，就自下而上的三个条带来说，酶切的那个分子量有点诡异，不过也差不多位置啊。
至于做超滤，得看你的分子量，用5kd的做透析，损失不大的。
看你透析后的溶液，感觉蛋白好浓，是不是聚 ...

位置是差不多，但是有2条带，麻烦啊，应该是聚集了。离心的话可以离心出沉淀的。主要是在蛋白复性方面也没有什么人指导，不知道到底接下来要怎么弄
赞一下 回复此楼
13楼2014-02-28 15:56:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
血性红魔7楼
2014-02-20 20:26   回复  
极道始之魔11楼
2014-02-20 20:50   回复  
引用回帖:
7楼: Originally posted by 血性红魔 at 2014-02-20 20:26:52

相关版块跳转 我要订阅楼主 极道始之魔 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料与化工调剂，339 +9 10213207 2026-03-31 9/450 2026-04-01 00:49 by fmesaito
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +12 Koxui 2026-03-28 12/600 2026-03-31 23:17 by wwytracy
[考研] 调剂推荐 +7 清酒714 2026-03-26 8/400 2026-03-31 22:12 by 544594351
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 海纳百川Ly 2026-03-29 6/300 2026-03-31 21:06 by yuq
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-30 11/550 2026-03-31 17:33 by AZMK
[考研] 080500-315分复试调剂 +9 上岸3821 2026-03-31 9/450 2026-03-31 17:29 by 唐沐儿
[基金申请] 面上5B能上会吗？ +8 redcom 2026-03-29 8/400 2026-03-31 15:53 by niuailing
[考研] 土木304求调剂 +3 顶级擦擦 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:59 by 西京学院招办
[考研] 08工科，295，接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +9 @taotao 2026-03-29 9/450 2026-03-30 22:29 by 我是小康
[考研] 304材料求调剂 +5 钟llll 2026-03-26 5/250 2026-03-30 19:37 by 源_2020
[考研] 310求调剂 +10 争取九点睡 2026-03-30 10/500 2026-03-30 16:45 by ztnimte
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +8 mikasa的围巾 2026-03-28 8/400 2026-03-29 12:48 by 无际的草原
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭