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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关毕赤酵母表达
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aabbwestone

银虫 (初入文坛)

[求助] 有关毕赤酵母表达已有3人参与

求助：毕赤酵母表达外源基因是先把基因连到质粒上，然后线性化质粒，再整合到酵母染色体上的吗，用的质粒是pPIC9K，原理步骤是否和大肠杆菌表达相同
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rightbackinthewater
1楼2014-02-10 14:11:51
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-29 23:58:44
酵母真核表达，质粒是通过重组到基因组上进行表达的。而原核知质粒直接在细胞内诱导表达。pPIC9k好像是用甲醇诱导，还有抗性条件的筛选。
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3楼2014-02-10 18:08:09
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-02-10 16:42:41
原理差不多。就是一个是真核表达系统。另一个是原核表达系统。
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hehe
2楼2014-02-10 15:28:36
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-29 23:59:05
gyesang: 回帖置顶 2014-03-29 23:59:06
酵母表达周期长，大肠表达周期短；毕赤酵母表达有一定的翻译后加工能力,如糖基化、折叠、翻译后修饰现象，适合于表达真核生物基因，有些表达载体具有分泌信号肽序列，能将表达的蛋白质分泌到胞外，方便纯化，而大肠没有没有这些特点。含目的基因的pPIC9K阳性菌株可用含有不同浓度的G418（筛选多拷贝用）或MD平板筛选，PCR鉴定阳性后，用低浓度甲醇（如0.5%-1%）诱导表达。
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爱拼才会赢
4楼2014-02-10 22:24:16
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