应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC问题求助高手
441/5返回列表12345下一页
查看: 2679  |  回复: 43
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] HPLC问题求助高手 已有3人参与

2000年购买的Bio-Rad 公司的Biologic DuoFlow Chromatography System，一直用于分析蛋白质（凝胶色谱及离子交换色谱）。最近3－4年没有人使用了，一直闲置。现在想用于反相HPLC分析，所以新买了C18色谱柱，但还没有连接上C18色谱柱。准备先试验一下系统是否还工作。遇到了麻烦。

流动相A: 0.1% TFA/水；流动相B: 0.1% 乙腈。使用前，2个流动相溶液都分别用超声波清洗器做15分钟脱气处理。

开始试验系统。流动相：A 90%， B 10%，走3分钟；然后A从 90%到0%， B从 10%到100%，走25分钟。

可以看到，没有连接色谱柱的情况下，色谱图出现很多峰，特别是在走梯度的时候。如果单纯走水，没有这些峰。

水占90%的时候，峰也很少。好像是每间隔2分钟，就出1个峰。是气泡峰吗？还是以前管线里面沉积的蛋白残留物？

本人没有操作过HPLC，是新手，身边没有人请教。现请教小木虫上都专家和高手，怎么解决？万分感谢！
HPLC问题求助高手
HPLC-BioLogic DuoFlow.PNG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
1楼 2014-02-07 22:41:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wang2005054

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 谢谢，欢迎常来分析版交流 2014-02-08 12:25:30
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版 2014-02-11 08:13:35
多走几次吧，对比图谱是否一致，如果有杂质，图谱会随清洗次数增加而发生变化，如果图谱一致没变化，说明乙腈可能有问题！这样可以排除乙腈的问题！然后再换其它牌号、批次的乙腈做对比，总之，多走几个图谱再说！！！
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2014-02-08 08:18:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+1, 谢谢 2014-02-08 12:24:44
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版 2014-02-11 08:14:38
不一定是乙腈的问题，你把AB两相都换成纯化水，在走一下，如果还这样，应该是仪器的问题。你的仪器很久没用，管路、泵、检测器都有可能状态不好，看你的基线，我的直觉是泵有问题，排除流动相原因，有可能是步进电机或控制主板有问题，你接上一根阻尼管或色谱柱观察一下压力波动情况。
赞一下(1人) 回复此楼
快乐不需要走遍天涯去寻找，只需播一粒种子在脚下。
11楼2014-02-08 08:50:33
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版，辛苦了 2014-02-11 08:13:53
先看看你的乙腈是不是有问题吧
赞一下 回复此楼
WorkFinishPublish
2楼2014-02-08 02:04:24
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by whynotbest at 2014-02-08 02:04:24
先看看你的乙腈是不是有问题吧

乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。

产品订购来源：
https://ca.vwr.com/store/catalog ... g_number=CAAX0145-1

产品检验报告：https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf
赞一下 回复此楼
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
3楼2014-02-08 02:42:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫
引用回帖:
3楼: Originally posted by bobcanada at 2014-02-08 02:42:16
乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。

产品订购来源：
https://ca.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=CAAX0145-1

产品检验报告：https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf...

不管你乙腈是哪里来的 你起码可以一个个排除可能的因素试试
赞一下 回复此楼
WorkFinishPublish
4楼2014-02-08 02:48:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by whynotbest at 2014-02-08 02:48:08
不管你乙腈是哪里来的 你起码可以一个个排除可能的因素试试...

流动相A: 0.1% TFA/水；流动相B:甲醇。使用前，2个流动相溶液都分别用超声波清洗器做15分钟脱气处理。

开始试验系统。流动相：A 90%， B 10%，走3分钟；然后A从 90%到0%， B从 10%到100%，走25分钟。

可以看到，没有连接色谱柱的情况下，色谱图出现很多峰，特别是在走梯度的时候。如果单纯走水，没有这些峰。
HPLC问题求助高手-1
hplc-methanol.PNG
赞一下 回复此楼
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
5楼2014-02-08 03:56:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
1楼错误更正：流动相A: 0.1% TFA/水；流动相B: 0.1% TFA/乙腈。
赞一下 回复此楼
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
6楼2014-02-08 03:57:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
在没有连接上色谱柱（只是单纯的管路连接）的情况下，分别用甲醇和乙腈作为流动相B，梯度（B 10% for 3 mins, then B 10%－100% in 25 mins）走的色谱图。哪里来的那么多杂峰？是管路内的蛋白沉积物，还是气泡？
赞一下 回复此楼
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
7楼2014-02-08 04:03:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by whynotbest at 2014-02-08 02:48:08
不管你乙腈是哪里来的 你起码可以一个个排除可能的因素试试...

如何检查HPLC专用的乙腈或甲醇是否有问题？我没有经验。谢谢！
赞一下 回复此楼
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
8楼2014-02-08 04:06:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wx_55

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版，辛苦了 2014-02-11 08:14:20
再换一个牌子的乙腈试试，或者换另外一个批次的乙腈试试，再或者先用热水或高浓度乙腈长时间冲刷管路
赞一下 回复此楼
9楼2014-02-08 07:24:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bobcanada 的主题更新
441/5返回列表12345下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +11 汪！？！ 2026-04-10 13/650 2026-04-10 23:16 by Ftglcn90
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸，感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550， 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 0702物理学学硕299求调剂 +6 祁柒连 2026-04-06 6/300 2026-04-10 11:10 by Roomoo
[考研] 材料专硕283求调剂 +18 试试看呗 2026-04-04 19/950 2026-04-10 10:05 by may_新宇
[考研] 278求调剂 +27 范婷娜 2026-04-07 31/1550 2026-04-09 20:49 by zhouxiaoyu
[考研] 调剂 +8 只叙离别辞 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:25 by zl8213662
[考研] 求调剂，262机械专硕 +6 嗯yyl 2026-04-08 6/300 2026-04-09 12:01 by zhouyuwinner
[考研] 070300化学279求调剂 +17 哈哈哈^_^ 2026-04-08 18/900 2026-04-09 10:49 by 三七七想上岸
[考研] 招收有机化学、化工，药学，食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 085404，334分，求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
[考研] 0854电子信息319求调剂（接受跨专业调剂） +5 星星不眨眼喽 2026-04-05 6/300 2026-04-07 22:16 by hemengdong
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
[考研] 第一志愿东南大学物理313，有科研竞赛获奖经历，希望物理复试调剂 +3 马内橙 2026-04-05 3/150 2026-04-06 10:32 by 蓝云思雨
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿9材料学硕297已过六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-04-04 12/600 2026-04-05 19:04 by 蓝云思雨
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 材料调剂 +9 革微桂 2026-04-04 9/450 2026-04-05 08:27 by 544594351
[考研] 求生物学学硕调剂——364分 +7 云朵遛弯指南 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:49 by zhyzzh
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭