应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC问题求助高手
51/1返回列表
查看: 2643  |  回复: 43
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] HPLC问题求助高手 已有3人参与

2000年购买的Bio-Rad 公司的Biologic DuoFlow Chromatography System，一直用于分析蛋白质（凝胶色谱及离子交换色谱）。最近3－4年没有人使用了，一直闲置。现在想用于反相HPLC分析，所以新买了C18色谱柱，但还没有连接上C18色谱柱。准备先试验一下系统是否还工作。遇到了麻烦。

流动相A: 0.1% TFA/水；流动相B: 0.1% 乙腈。使用前，2个流动相溶液都分别用超声波清洗器做15分钟脱气处理。

开始试验系统。流动相：A 90%， B 10%，走3分钟；然后A从 90%到0%， B从 10%到100%，走25分钟。

可以看到，没有连接色谱柱的情况下，色谱图出现很多峰，特别是在走梯度的时候。如果单纯走水，没有这些峰。

水占90%的时候，峰也很少。好像是每间隔2分钟，就出1个峰。是气泡峰吗？还是以前管线里面沉积的蛋白残留物？

本人没有操作过HPLC，是新手，身边没有人请教。现请教小木虫上都专家和高手，怎么解决？万分感谢！
HPLC问题求助高手
HPLC-BioLogic DuoFlow.PNG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
1楼 2014-02-07 22:41:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
在没有连接上色谱柱（只是单纯的管路连接）的情况下，分别用甲醇和乙腈作为流动相B，梯度（B 10% for 3 mins, then B 10%－100% in 25 mins）走的色谱图。哪里来的那么多杂峰？是管路内的蛋白沉积物，还是气泡？
赞一下 回复此楼
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
7楼2014-02-08 04:03:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 44 个回答

whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版，辛苦了 2014-02-11 08:13:53
先看看你的乙腈是不是有问题吧
赞一下 回复此楼
WorkFinishPublish
2楼2014-02-08 02:04:24
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by whynotbest at 2014-02-08 02:04:24
先看看你的乙腈是不是有问题吧

乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。

产品订购来源：
https://ca.vwr.com/store/catalog ... g_number=CAAX0145-1

产品检验报告：https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf
赞一下 回复此楼
小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
3楼2014-02-08 02:42:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫
引用回帖:
3楼: Originally posted by bobcanada at 2014-02-08 02:42:16
乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。

产品订购来源：
https://ca.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=CAAX0145-1

产品检验报告：https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf...

不管你乙腈是哪里来的 你起码可以一个个排除可能的因素试试
赞一下 回复此楼
WorkFinishPublish
4楼2014-02-08 02:48:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 44 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 化学求调剂 +3 临泽境llllll 2026-03-17 4/200 2026-03-19 13:59 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +3 18889395102 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:53 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +10 SUICHILD 2026-03-12 10/500 2026-03-19 09:51 by Delta2012
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭