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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC问题求助高手
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bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] HPLC问题求助高手 已有3人参与

2000年购买的Bio-Rad 公司的Biologic DuoFlow Chromatography System，一直用于分析蛋白质（凝胶色谱及离子交换色谱）。最近3－4年没有人使用了，一直闲置。现在想用于反相HPLC分析，所以新买了C18色谱柱，但还没有连接上C18色谱柱。准备先试验一下系统是否还工作。遇到了麻烦。

流动相A: 0.1% TFA/水；流动相B: 0.1% 乙腈。使用前，2个流动相溶液都分别用超声波清洗器做15分钟脱气处理。

开始试验系统。流动相：A 90%， B 10%，走3分钟；然后A从 90%到0%， B从 10%到100%，走25分钟。

可以看到，没有连接色谱柱的情况下，色谱图出现很多峰，特别是在走梯度的时候。如果单纯走水，没有这些峰。

水占90%的时候，峰也很少。好像是每间隔2分钟，就出1个峰。是气泡峰吗？还是以前管线里面沉积的蛋白残留物？

本人没有操作过HPLC，是新手，身边没有人请教。现请教小木虫上都专家和高手，怎么解决？万分感谢！
HPLC问题求助高手
HPLC-BioLogic DuoFlow.PNG
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小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
1楼 2014-02-07 22:41:39
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whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫
引用回帖:
3楼: Originally posted by bobcanada at 2014-02-08 02:42:16
乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。

产品订购来源：
https://ca.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=CAAX0145-1

产品检验报告：https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf...

不管你乙腈是哪里来的 你起码可以一个个排除可能的因素试试
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WorkFinishPublish
4楼2014-02-08 02:48:08
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whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版，辛苦了 2014-02-11 08:13:53
先看看你的乙腈是不是有问题吧
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WorkFinishPublish
2楼2014-02-08 02:04:24
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bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by whynotbest at 2014-02-08 02:04:24
先看看你的乙腈是不是有问题吧

乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。

产品订购来源：
https://ca.vwr.com/store/catalog ... g_number=CAAX0145-1

产品检验报告：https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf
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小木虫-知识宝库的入口。今天，你小木虫了没有？
3楼2014-02-08 02:42:16
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bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by whynotbest at 2014-02-08 02:48:08
不管你乙腈是哪里来的 你起码可以一个个排除可能的因素试试...

流动相A: 0.1% TFA/水；流动相B:甲醇。使用前，2个流动相溶液都分别用超声波清洗器做15分钟脱气处理。

开始试验系统。流动相：A 90%， B 10%，走3分钟；然后A从 90%到0%， B从 10%到100%，走25分钟。

可以看到，没有连接色谱柱的情况下，色谱图出现很多峰，特别是在走梯度的时候。如果单纯走水，没有这些峰。
HPLC问题求助高手-1
hplc-methanol.PNG
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5楼2014-02-08 03:56:13
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