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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC问题求助高手
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+1, 谢谢 2014-02-08 12:24:44
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版 2014-02-11 08:14:38
不一定是乙腈的问题，你把AB两相都换成纯化水，在走一下，如果还这样，应该是仪器的问题。你的仪器很久没用，管路、泵、检测器都有可能状态不好，看你的基线，我的直觉是泵有问题，排除流动相原因，有可能是步进电机或控制主板有问题，你接上一根阻尼管或色谱柱观察一下压力波动情况。
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快乐不需要走遍天涯去寻找，只需播一粒种子在脚下。
11楼2014-02-08 08:50:33
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liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流，欢迎常来分析版 2014-02-11 08:14:51
系统太脏了，建议用异丙醇小流速冲洗系统，然后再换回你的流动相。

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12楼2014-02-08 09:00:43
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花雨渡飞仙

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 谢谢，欢迎常来分析版交流 2014-02-08 12:29:57
bobcanada: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-02-14 03:00:48
建议先冲洗系统，用适宜浓度的氢氧化钠溶液冲洗数个小时，然后用纯水冲洗数个小时，最后如果不接柱子，建议在电导池后面加一个0.1mpa的背压，没有背压是很容易出气泡的。
另外，有机溶液会破坏pH电极，请将之离线。
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13楼2014-02-08 09:08:55
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+1, 谢谢 2014-02-08 12:24:11
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢，辛苦了 2014-02-11 08:15:06
三个方面去考虑：
1、管路中的残留
2、色谱柱中的残留
3、不干净的流动相
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14楼2014-02-08 10:14:48
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jct111111

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bobcanada: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-02-14 03:01:27
应该不是溶剂的问题，如果是溶剂的问题，峰不会这么整齐。还是系统的问题，可以考虑用异丙醇对系统进行长时间冲洗，冲洗系统后，再进行问题的排查
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15楼2014-02-08 13:40:55
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bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
11楼: Originally posted by kf1009 at 2014-02-08 08:50:33
不一定是乙腈的问题，你把AB两相都换成纯化水，在走一下，如果还这样，应该是仪器的问题。你的仪器很久没用，管路、泵、检测器都有可能状态不好，看你的基线，我的直觉是泵有问题，排除流动相原因，有可能是步进电机 ...

A、B两相以前都用的是水，没有任何杂峰出现。

我们隔壁实验室的这台Bio-rad 公司的Biologic DuoFlow 色谱系统，其实主要是用于蛋白分离的中压色谱，特别是离子交换和凝胶（排阻）色谱，是2000年12月购买的，已经13年了，一直用于蛋白的分离。最近我们实验室需要分离小分子多肽，没有HPLC，就准备把这台Bio-rad 公司的的FPLC（快速蛋白液相色谱）用于反相HPLC的分离工作。根据说明书，这台仪器的泵压可以达到HPLC泵的水平，可以连接上反相C18柱，作为反相HPLC使用。

4年前有人用过这台仪器，后来就一直闲置在一旁。由于以前操作人员早已离开，没有人请教，我自己摸索了一段时间，才弄明白如何使用。A、B两相都是用纯水做流动相进行试验的，仪器一切正常。这样，我才订购了比较便宜的HPLC专用乙腈和甲醇（EMD公司），又买了一根C18反相分析柱。由于担心系统管路不干净，弄脏新买的C18反相分析柱，所以没有接上柱子，只是单纯地跑0.1%TFA/水及0.1%TFA/乙腈，看看是否正常，结果发现开始梯度时，很多的杂峰。昨天，我又用0.1%TFA/水及纯甲醇走梯度，好像杂峰更多。

我想乙腈和甲醇都是HPLC级别的专用溶剂，即使质量有可能有问题，不会出这么多的峰吧？如果说是系统管路不干净，在没有连接色谱柱的情况下，管路内壁可以存留那么多的杂质吗？上上周我已经用水和乙腈冲洗（正、反梯度）过一周的管路了，情况没有任何改善。是否是气泡的原因呢？

下周，我准备单纯用乙腈、甲醇、异丙醇冲洗管路，看看是否有峰出来。
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16楼2014-02-09 03:38:58
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bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
11楼: Originally posted by kf1009 at 2014-02-08 08:50:33
不一定是乙腈的问题，你把AB两相都换成纯化水，在走一下，如果还这样，应该是仪器的问题。你的仪器很久没用，管路、泵、检测器都有可能状态不好，看你的基线，我的直觉是泵有问题，排除流动相原因，有可能是步进电机 ...

我用纯水冲洗过好就，主要是以前用缓冲溶液冲洗的，我担心管路内有盐沉积，所以用水洗过几天。

不接上色谱柱，是否会造成气泡过多？我怕把新买的C18柱弄脏了，柱子好贵呢。
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17楼2014-02-09 03:44:19
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bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 花雨渡飞仙 at 2014-02-08 09:08:55
建议先冲洗系统，用适宜浓度的氢氧化钠溶液冲洗数个小时，然后用纯水冲洗数个小时，最后如果不接柱子，建议在电导池后面加一个0.1mpa的背压，没有背压是很容易出气泡的。
另外，有机溶液会破坏pH电极，请将之离线。

用稀氢氧化钠溶液冲洗管路，不会造成管路的伤害吗？
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18楼2014-02-09 03:50:34
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bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)
原来的流速是0.2-0.3ml/min，上面显示的压力是0。流速1.0ml/min我也用过，压力大约是40PSI，上面的杂峰也是很多。后来我为了节约流动相，才将流速调低的。

请问各位，冲洗柱子用流速多少比较合适？谢谢各位。
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19楼2014-02-09 04:09:30
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匿名

禁虫 (知名作家)
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20楼2014-02-09 05:11:30
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