应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 从氨基酸序列到基因克隆
51/1返回列表
查看: 1746  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yzliuxi

银虫 (初入文坛)

[求助] 从氨基酸序列到基因克隆 已有5人参与

求助各位高人，本人对分子一无所知，不料却被领导要求写东西，被搞得晕头转向，文献也看不明白。
    我的设想是分离出的一种肽类活性物质，通过edman降解获得氨基酸序列，然后怎么样通过获得的氨基酸序列得到这种物质的基因呢（假设搜索不到什么同源序列之类的）？具体采取什么技术方法？
    我只大概的知道要设计引物，用RACE获得全长。其余的具体怎么描述啊？
    拜托大家帮帮忙。。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-06 23:22:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:03:25
引用回帖:
4楼: Originally posted by yzliuxi at 2014-02-07 15:59:33
你看一下我这样的描述对不对。我这多肽是从一生物中分离出来的。
    先提取该生物的总RNA，反转录成cDNA。
    根据edman降解获得的氨基酸序列设计兼并引物，以反转录得到的cDNA为模板进行pcr扩增获得目的基因的 ...

PCR产物双向测通，如果下游有poly(A)尾巴就更好，即使没有寻找读码框，就基本得到比较完整的基因了，再翻译成氨基酸序列。你分离的多肽可以用质谱得到比较多的氨基酸序列信息。再比较氨基酸序列，可以进一步判断。如果结合NCBI的Genbank的相似核酸序列和蛋白质序列，可以帮助判断序列的结构。
赞一下 回复此楼
为什么
7楼2014-02-08 18:22:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

RXMCDM

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-07 12:55:48
yzliuxi: 金币+10, ★有帮助 2014-02-07 23:27:00
通过edman降解获得氨基酸序列，通过获得的氨基酸序列得到这种物质基因编码区，加非编码区、内含子等得到这种物质的基因。其他的可以请生物公司帮你做了。
赞一下 回复此楼
？
2楼2014-02-07 02:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-07 12:55:57
yzliuxi: 金币+20, ★有帮助 2014-02-07 23:27:31
如果不对目标蛋白的基因进行研究，只要得到表达蛋白的基因，可以人工合成基因。如果要克隆到原基因，可以考虑根据测到的蛋白序列设计简并引物，对Oligo(dT)反转录的cDNA文库进行PCR扩增。根据提取的蛋白大小估计PCR扩增片段的大小，测序鉴定。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
为什么
3楼2014-02-07 10:31:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzliuxi

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2014-02-07 10:31:31
如果不对目标蛋白的基因进行研究，只要得到表达蛋白的基因，可以人工合成基因。如果要克隆到原基因，可以考虑根据测到的蛋白序列设计简并引物，对Oligo(dT)反转录的cDNA文库进行PCR扩增。根据提取的蛋白大小估计PCR ...

你看一下我这样的描述对不对。我这多肽是从一生物中分离出来的。
    先提取该生物的总RNA，反转录成cDNA。
    根据edman降解获得的氨基酸序列设计兼并引物，以反转录得到的cDNA为模板进行pcr扩增获得目的基因的cDNA序列。
    问题是，这样pcr获得的是不是序列的全长？
怎么鉴定获得的cDNA序列？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-07 15:59:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 344求调剂 +5 knight344 2026-03-16 5/250 2026-03-18 12:39 by 学员HHvs9Y
[考研] 0703化学调剂 +4 pupcoco 2026-03-17 7/350 2026-03-18 12:14 by djl2006
[考研] 281求调剂（0805） +4 烟汐忆海 2026-03-16 11/550 2026-03-18 11:57 by djl2006
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 8/400 2026-03-17 19:03 by Wangjingyue
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 302求调剂 +9 负心者当诛 2026-03-11 9/450 2026-03-17 17:13 by ruiyingmiao
[考研] 26考研求调剂 +6 丶宏Sir 2026-03-13 6/300 2026-03-17 16:13 by 醉在风里
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭