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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 从氨基酸序列到基因克隆
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yzliuxi

银虫 (初入文坛)

[求助] 从氨基酸序列到基因克隆 已有5人参与

求助各位高人，本人对分子一无所知，不料却被领导要求写东西，被搞得晕头转向，文献也看不明白。
    我的设想是分离出的一种肽类活性物质，通过edman降解获得氨基酸序列，然后怎么样通过获得的氨基酸序列得到这种物质的基因呢（假设搜索不到什么同源序列之类的）？具体采取什么技术方法？
    我只大概的知道要设计引物，用RACE获得全长。其余的具体怎么描述啊？
    拜托大家帮帮忙。。。。

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1楼 2014-02-06 23:22:34
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yzliuxi

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2014-02-07 10:31:31
如果不对目标蛋白的基因进行研究，只要得到表达蛋白的基因，可以人工合成基因。如果要克隆到原基因，可以考虑根据测到的蛋白序列设计简并引物，对Oligo(dT)反转录的cDNA文库进行PCR扩增。根据提取的蛋白大小估计PCR ...

你看一下我这样的描述对不对。我这多肽是从一生物中分离出来的。
    先提取该生物的总RNA，反转录成cDNA。
    根据edman降解获得的氨基酸序列设计兼并引物，以反转录得到的cDNA为模板进行pcr扩增获得目的基因的cDNA序列。
    问题是，这样pcr获得的是不是序列的全长？
怎么鉴定获得的cDNA序列？

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4楼2014-02-07 15:59:33
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RXMCDM

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-07 12:55:48
yzliuxi: 金币+10, ★有帮助 2014-02-07 23:27:00
通过edman降解获得氨基酸序列，通过获得的氨基酸序列得到这种物质基因编码区，加非编码区、内含子等得到这种物质的基因。其他的可以请生物公司帮你做了。
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？
2楼2014-02-07 02:05:00
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-07 12:55:57
yzliuxi: 金币+20, ★有帮助 2014-02-07 23:27:31
如果不对目标蛋白的基因进行研究，只要得到表达蛋白的基因，可以人工合成基因。如果要克隆到原基因，可以考虑根据测到的蛋白序列设计简并引物，对Oligo(dT)反转录的cDNA文库进行PCR扩增。根据提取的蛋白大小估计PCR扩增片段的大小，测序鉴定。

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为什么
3楼2014-02-07 10:31:31
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050605044

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
找到转录RNA，反转录！
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食品
5楼2014-02-07 16:33:43
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