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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于16S细菌鉴定中的问题
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

[求助] 关于16S细菌鉴定中的问题 已有2人参与

各位虫友，本人做16SrDNA细菌学鉴定，使用修改后的CTAB和酚氯仿组合方法提取，然后使用27F/1492R引物PCR扩增，以前用此方法都是批量进行DNA提取和分析，偶尔当然会有一两个不出来，但是最近遇到的一批菌，在LB上生长很好，但是用此方法却始终无法提取16SrDNA或是PCR无产物，无法分析，操作程序未发生改变，然后参考一些其他人提取DNA的方法也没有得到PCR产物，不知道是什么原因？
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1楼 2014-01-17 16:03:05
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 阿督嘎 at 2014-04-01 08:43:32
有没有排除是pcr反应体系的试剂有问题呢？以前有人遇到类似问题，一个多月p不出东西，原来是试剂被污染了。。。

应该不是PCR反应体系的问题  以前都用的这种体系和试剂  估计是没有抽提得到模板DNA   下次考虑加上阳性对照菌株试试
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兴趣是第一导师，我爱它，因此我毫无疲倦的探索
7楼2014-04-06 14:38:10
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lulina1211

铜虫 (初入文坛)
请问引物选择的依据是什么？怎么选择引物？
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加油，坚持！等待！相信自己！谦逊！
2楼2014-03-26 10:53:34
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)
一般细菌鉴定都使用通用引物，当然如果你做其他分子生物学实验引物是根据需要设计的，有专门软件

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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兴趣是第一导师，我爱它，因此我毫无疲倦的探索
3楼2014-03-31 15:18:05
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bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你提取的基因组DNA的量多吗？要是量很多最好是将基因组DNA模板稀释后再PCR
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前方总有更多挑战，战胜恐惧，勇往向前，加油~~~~
4楼2014-04-01 08:23:22
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