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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

[求助] 关于16S细菌鉴定中的问题 已有2人参与

各位虫友,本人做16SrDNA细菌学鉴定,使用修改后的CTAB和酚氯仿组合方法提取,然后使用27F/1492R引物PCR扩增,以前用此方法都是批量进行DNA提取和分析,偶尔当然会有一两个不出来,但是最近遇到的一批菌,在LB上生长很好,但是用此方法却始终无法提取16SrDNA或是PCR无产物,无法分析,操作程序未发生改变,然后参考一些其他人提取DNA的方法也没有得到PCR产物,不知道是什么原因?
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兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
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lulina1211

铜虫 (初入文坛)

请问引物选择的依据是什么?怎么选择引物?
加油,坚持!等待!相信自己!谦逊!
2楼2014-03-26 10:53:34
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

一般细菌鉴定都使用通用引物,当然如果你做其他分子生物学实验引物是根据需要设计的,有专门软件

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
3楼2014-03-31 15:18:05
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bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你提取的基因组DNA的量多吗?要是量很多最好是将基因组DNA模板稀释后再PCR
前方总有更多挑战,战胜恐惧,勇往向前,加油~~~~
4楼2014-04-01 08:23:22
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阿督嘎

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


hkqgeoffrey: 金币+1, 有帮助 2014-04-06 14:38:22
有没有排除是pcr反应体系的试剂有问题呢?以前有人遇到类似问题,一个多月p不出东西,原来是试剂被污染了。。。
5楼2014-04-01 08:43:32
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bikexmx at 2014-04-01 08:23:22
你提取的基因组DNA的量多吗?要是量很多最好是将基因组DNA模板稀释后再PCR

估计是没有抽提得到模板DNA
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
6楼2014-04-06 14:36:41
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 阿督嘎 at 2014-04-01 08:43:32
有没有排除是pcr反应体系的试剂有问题呢?以前有人遇到类似问题,一个多月p不出东西,原来是试剂被污染了。。。

应该不是PCR反应体系的问题  以前都用的这种体系和试剂  估计是没有抽提得到模板DNA   下次考虑加上阳性对照菌株试试
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
7楼2014-04-06 14:38:10
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