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wyysunshine

木虫 (知名作家)

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注册: 2013-06-29
专业: 植物遗传学

[求助] 引物二聚体与目的条带一样亮，怎么破？已有1人参与

要扩增的目的条带600 bp，目前程序：94度4min，94度30s，58度1min，72度1min，37个循环，72度10min，用于测序~~
调了不同的退火温度、时间，延伸时间等（退火59度扩出来很弱），现在扩出来的目的条带较好，但同时引物二聚体也很亮，甚至比目的条带还要亮！偶尔还有弱的杂带。。。
已试过延长退火时间，但扩增效果不好。不知道还有神马方法可以降低引物二聚体的，真希望目的条带能有引2那么亮就好了！！！
附图1张，请大神们支支招~~用于测序

引物二聚体与目的条带一样亮，怎么破？

未命名.jpg

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顺其自然~~

1楼 2014-01-06 21:38:27

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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:45:29
wyysunshine: 金币+4, 谢谢，正在尝试中 2014-01-07 13:43:58

最根本是重新设计引物

调低一下引物的浓度
提高一下退火温度会有些许改善

借你一生好不好

2楼2014-01-06 23:56:11

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