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wyysunshine

木虫 (知名作家)

[求助] 引物二聚体与目的条带一样亮,怎么破? 已有1人参与

要扩增的目的条带600 bp,目前程序:94度4min,94度30s,58度1min,72度1min,37个循环,72度10min,用于测序~~
调了不同的退火温度、时间,延伸时间等(退火59度扩出来很弱),现在扩出来的目的条带较好,但同时引物二聚体也很亮,甚至比目的条带还要亮!偶尔还有弱的杂带。。。
已试过延长退火时间,但扩增效果不好。不知道还有神马方法可以降低引物二聚体的,真希望目的条带能有引2那么亮就好了!!!
附图1张,请大神们支支招~~用于测序

引物二聚体与目的条带一样亮,怎么破?
未命名.jpg
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顺其自然~~
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:45:29
wyysunshine: 金币+4, 谢谢,正在尝试中 2014-01-07 13:43:58
最根本是重新设计引物

调低一下引物的浓度
提高一下退火温度 会有些许改善
借你一生好不好
2楼2014-01-06 23:56:11
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