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woshiguiren

木虫 (小有名气)

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[求助] 请教，镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗？已有4人参与

本人做了一段时间镍柱蛋白纯化的实验，知道咪唑会和蛋白竞争性与镍柱结合，从而使His-tag蛋白从镍柱上脱离。想请教，纯化结束后，结合到镍柱上的咪唑用除去吗？如果用，怎么除去？如果不用，那么对下一次的蛋白挂住有影响吗？（实验所用镍柱为GE公司His-tag镍柱）

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充实的生活

1楼 2013-12-28 22:37:52

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剑客心语

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-29 16:08:00

我一般是用2M的NaCl洗下柱子，用来降低或去除柱子上的咪唑。否者，柱子中的高浓度咪唑会影响蛋白与柱子结合。

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