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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 请教，镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗？
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woshiguiren

木虫 (小有名气)

[求助] 请教，镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗？ 已有4人参与

本人做了一段时间镍柱蛋白纯化的实验，知道咪唑会和蛋白竞争性与镍柱结合，从而使His-tag蛋白从镍柱上脱离。想请教，纯化结束后，结合到镍柱上的咪唑用除去吗？如果用，怎么除去？如果不用，那么对下一次的蛋白挂住有影响吗？（实验所用镍柱为GE公司His-tag镍柱）
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充实的生活
1楼 2013-12-28 22:37:52
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青青子衿1987

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-29 16:08:07
柱子下次再用之前需要先再生，再生的方法:先用含有EDTA的buffer把Ni洗脱下来，再用氢氧化钠浸泡，用略偏碱性的buffer平衡后，在上Ni。既然咪唑是和蛋白竞争才可以把目的蛋白洗脱下来，那么再次和蛋白结合之前，应该还是要再生的。
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3楼2013-12-28 23:44:32
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青青子衿1987

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by johnny4890 at 2014-03-09 01:02:29
这个方法会害死人的，不要随便再生。再生有风险，谨慎。
...

为什么啊，我们组一直用的这种方法再生镍柱啊，求解释啊！
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6楼2014-03-10 18:27:51
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