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woshiguiren

木虫 (小有名气)

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[求助] 请教，镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗？已有4人参与

本人做了一段时间镍柱蛋白纯化的实验，知道咪唑会和蛋白竞争性与镍柱结合，从而使His-tag蛋白从镍柱上脱离。想请教，纯化结束后，结合到镍柱上的咪唑用除去吗？如果用，怎么除去？如果不用，那么对下一次的蛋白挂住有影响吗？（实验所用镍柱为GE公司His-tag镍柱）

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充实的生活

1楼 2013-12-28 22:37:52

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ljq325

铁杆木虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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woshiguiren(kx444555代发): 金币+5, 鼓励交流 2014-01-02 08:33:53
woshiguiren: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-01-06 20:25:00

过完镍柱后，用超纯水冲冲柱子就可以，一般不会影响下次挂镍
这样用过几次后就需要再生，
我们用的步骤是
1.脱镍Buffer（含EDTA）冲洗1-2个柱体积
2.超纯水冲洗3个柱体积
3.用0.5mol/L的NaOH冲洗0.5-1柱体积
4.超纯水冲洗3个柱体积
5.用1M硫酸铜挂镍

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