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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR优化如何除去出二聚体
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小星丹925

木虫 (著名写手)

[交流] PCR优化如何除去出二聚体

最近PCR出来这个结果，希望懂PCR的帮帮忙，给提提建议，我应该怎么优化一下
我的目的条带第一个图是100bp，条带出了但很浅，且有二聚体，还模带，是哪里有问题呢？
第二个图是132bp的目的基因，也是条带出了 但很浅，而且有二聚体
PCR体系是 95度5min 94度30s，梯度退火30s，72度20s 终延伸10min 循环30次
温度梯度分别是图一 52-57.6（primer推荐最佳温度是50），图二 53.2-60.1（primer推荐最佳温度是53度）
希望大家帮帮忙，给点建议 非常感谢
PCR优化如何除去出二聚体
IL-4 100bp.jpg


PCR优化如何除去出二聚体-1
IFN-r 132bp.jpg
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1楼2013-12-22 14:05:38
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小星丹925: 金币+2, 谢谢 2013-12-23 09:13:18
少加引物

要根本上解决 重新设计引物
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4楼2013-12-22 17:24:00
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小星丹925 at 2013-12-23 09:15:20
我的引物是引用外国发的SCI文章的，
第一次P出来了，效果还行，后来就再也P不出了
引物我加的是浓度10umol的 1微升 应该减少到多少呢？
非常感谢...

2~5um 终浓度 试试
赞一下 回复此楼
11楼2013-12-23 09:58:01
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小星丹925 at 2013-12-23 09:15:20
我的引物是引用外国发的SCI文章的，
第一次P出来了，效果还行，后来就再也P不出了
引物我加的是浓度10umol的 1微升 应该减少到多少呢？
非常感谢...

2~5um 终浓度 试试
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12楼2013-12-23 09:58:19
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小星丹925 at 2013-12-23 09:15:20
我的引物是引用外国发的SCI文章的，
第一次P出来了，效果还行，后来就再也P不出了
引物我加的是浓度10umol的 1微升 应该减少到多少呢？
非常感谢...

2~5um 终浓度 试试
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13楼2013-12-23 09:58:34
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小星丹925 at 2013-12-23 09:15:20
我的引物是引用外国发的SCI文章的，
第一次P出来了，效果还行，后来就再也P不出了
引物我加的是浓度10umol的 1微升 应该减少到多少呢？
非常感谢...

2~5um 终浓度 试试
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14楼2013-12-23 09:58:43
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