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小星丹925

木虫 (著名写手)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 2010
帖子: 1105
在线: 119.3小时
虫号: 1641800

[交流] PCR优化如何除去出二聚体

最近PCR出来这个结果，希望懂PCR的帮帮忙，给提提建议，我应该怎么优化一下
我的目的条带第一个图是100bp，条带出了但很浅，且有二聚体，还模带，是哪里有问题呢？
第二个图是132bp的目的基因，也是条带出了但很浅，而且有二聚体
PCR体系是 95度5min 94度30s，梯度退火30s，72度20s 终延伸10min 循环30次
温度梯度分别是图一 52-57.6（primer推荐最佳温度是50），图二 53.2-60.1（primer推荐最佳温度是53度）
希望大家帮帮忙，给点建议非常感谢

PCR优化如何除去出二聚体

IL-4 100bp.jpg

PCR优化如何除去出二聚体-1

IFN-r 132bp.jpg

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1楼2013-12-22 14:05:38

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achonghello

金虫 (正式写手)

应助: 14 (小学生)
金币: 1362.4
帖子: 428
在线: 149.8小时
虫号: 1117060

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小星丹925: 金币+2, 谢谢你的帮助那我应该将退火温度提高到多少度呢？循环次数减少到多少比较好呢？ 2013-12-22 15:54:31

提高退火温度或者减少循环次数。。。

2楼2013-12-22 15:18:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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