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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR 扩增条带大小不对
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蚊在江湖

银虫 (小有名气)

[求助] PCR 扩增条带大小不对 已有6人参与

做半定量PCR
GAPDH内参，内参扩增没有问题

但是靶基因目的条带大小是100多bp，扩增出来的条带都小于100，但是又不像引物二聚体，最下面是引物二聚体的话，那上面一条是什么呢
PCR 扩增条带大小不对
HL RV 2-4   2013-12-18 18hr 19min.jpg
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1楼 2013-12-19 15:21:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蚊在江湖: 金币+5, ★★★很有帮助, 我准备重新设计长一点的目的条带的引物 2013-12-20 10:20:29
我觉得那就是目的条带, 不要相信marker
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4楼2013-12-20 02:20:30
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普通回帖

achonghello

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不好意思没做过半定量的
扩增条件还需要继续摸索吧。。。。
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2楼2013-12-19 15:48:58
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蚊在江湖

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by achonghello at 2013-12-19 15:48:58
不好意思没做过半定量的
扩增条件还需要继续摸索吧。。。。

其实和普通PCR一样
只不过是用cDNA为模板而已
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3楼2013-12-19 17:10:38
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tarring2013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 16:25:36
下面的条带很像引物二聚体，建议可以再重新设计一对引物试试；另外，这个基因有异构体吗？
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5楼2013-12-20 10:18:31
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不确定就去测个序，看看是什么东西。marker有时也不是很准的
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6楼2013-12-20 11:37:31
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-20 12:28:27
有时候产物的大小和marker指示的大小有一定出入时很正常的，从图来看，应该不是二聚体的条带，所以就只有两种可能，要么是，要么不是，将产物测个序就可以了。
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生物化学与分子生物学
7楼2013-12-20 11:53:59
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hoajie

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能你的Tm低了，扩增出非特异条带了。

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8楼2013-12-20 12:21:09
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zhang宇微

金虫 (正式写手)
换引物换模板重新

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9楼2013-12-20 12:37:02
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achonghello

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蚊在江湖 at 2013-12-19 17:10:38
其实和普通PCR一样
只不过是用cDNA为模板而已...

晕死，我们平时做的PCR都是用cDNA做模板啊。。。。
有非特异条带应该提高退火温度。。。
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10楼2013-12-20 14:18:23
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