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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 质粒接合实验详细步骤
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒接合实验详细步骤

我做的是耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌KPC基因的实验， 我最近做质粒接合实验已经五个月了，用的培养基都好几瓶子了，可是一直没有成功。我用的接合受体菌是大肠杆菌J53，筛选平板是200ug/ml叠氮钠和2ug/ml美罗培南，方法是将供体菌和受体菌按4:1的比例混合隔夜培养，然后将隔夜培养的细菌涂布在筛选平板上，隔夜培养发现没有细菌生长。
       哪位大神成功做过这个实验，能不能把你的详细步骤发给我，顺便帮我诊疗一下我这个癌症晚期的质粒接合实验还能成功吧？
      对了我以前也用过EC600，但也失败了，那个利福平溶解真费劲，还得用甲醇，我发现报道用的256ug/ml的利福平稍微有点不靠谱，我这边得用到400才能抑制住原菌的生长。
      迫切需要诊疗救治，哪位专家给看看。感谢奥
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1楼 2013-12-16 08:59:48
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lixiaoyu7

新虫 (初入文坛)
请问楼主成功了吗，我也做了好几个月也是肺克kpc用的ec600，利福平300亚胺2怎么转都转不过去，真的很悲伤

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4楼2018-11-27 00:50:42
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
自己頂一下，是不是把筛选平板上的抗生素浓度降低一下会有效果呢？
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2楼2013-12-18 09:35:09
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小木木_打野

新虫 (初入文坛)
楼主现在成功了吗？我是做的猪链，一个转移元件，也是不成功。
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3楼2015-04-28 10:39:31
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爱笑的小晔

禁虫
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5楼2020-12-01 13:24:39
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