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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒接合实验详细步骤

我做的是耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌KPC基因的实验, 我最近做质粒接合实验已经五个月了,用的培养基都好几瓶子了,可是一直没有成功。我用的接合受体菌是大肠杆菌J53,筛选平板是200ug/ml叠氮钠和2ug/ml美罗培南,方法是将供体菌和受体菌按4:1的比例混合隔夜培养,然后将隔夜培养的细菌涂布在筛选平板上,隔夜培养发现没有细菌生长。
       哪位大神成功做过这个实验,能不能把你的详细步骤发给我,顺便帮我诊疗一下我这个癌症晚期的质粒接合实验还能成功吧?
      对了我以前也用过EC600,但也失败了,那个利福平溶解真费劲,还得用甲醇,我发现报道用的256ug/ml的利福平稍微有点不靠谱,我这边得用到400才能抑制住原菌的生长。
      迫切需要诊疗救治,哪位专家给看看。感谢奥
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

自己頂一下,是不是把筛选平板上的抗生素浓度降低一下会有效果呢?
2楼2013-12-18 09:35:09
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小木木_打野

新虫 (初入文坛)

楼主现在成功了吗?我是做的猪链,一个转移元件,也是不成功。
3楼2015-04-28 10:39:31
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lixiaoyu7

新虫 (初入文坛)

请问楼主成功了吗,我也做了好几个月也是肺克kpc用的ec600,利福平300亚胺2怎么转都转不过去,真的很悲伤

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4楼2018-11-27 00:50:42
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5楼2020-12-01 13:24:39
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