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[求助]
质粒接合实验详细步骤
我做的是耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌KPC基因的实验， 我最近做质粒接合实验已经五个月了，用的培养基都好几瓶子了，可是一直没有成功。我用的接合受体菌是大肠杆菌J53，筛选平板是200ug/ml叠氮钠和2ug/ml美罗培南，方法是将供体菌和受体菌按4:1的比例混合隔夜培养，然后将隔夜培养的细菌涂布在筛选平板上，隔夜培养发现没有细菌生长。
哪位大神成功做过这个实验，能不能把你的详细步骤发给我，顺便帮我诊疗一下我这个癌症晚期的质粒接合实验还能成功吧？
对了我以前也用过EC600，但也失败了，那个利福平溶解真费劲，还得用甲醇，我发现报道用的256ug/ml的利福平稍微有点不靠谱，我这边得用到400才能抑制住原菌的生长。
迫切需要诊疗救治，哪位专家给看看。感谢奥 |
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